生物转化L-脯氨酸生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的定量分析方法

以芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)为柱前衍生剂,四硼酸钠为缓冲溶液,建立了一种柱前衍生反相高效液相色谱(RP-HPLC)测定微生物转化L-脯氨酸生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的定量分析方法。优化了衍生反应条件,当衍生反应体系中水和乙腈的比例为66∶34,p H值为9.9时衍生效果最佳。采用Agilent Extend C-18柱进行分离,以0.1%三氟乙酸水溶液和乙腈作为流动相,梯度洗脱,检测波长263 nm。L-脯氨酸和反式-4-羟基-L-脯氨酸均在0.01~5.00 mg/m L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999,检出限为5.00~7.00 ng/L,不同浓度下的平均回收率分别为98.9%~102%和97.9%~100%。该方法重现性好,精密度高,为定量分析微生物发酵液中的L-脯氨酸和反式-4-羟基-L-脯氨酸提供了有效方法。