增强型绿色荧光蛋白的色谱分离和纯化

增强型绿色荧光蛋白(EGFP)是生物领域常用的标记物。在前期成功克隆表达EGFP的基础上,本实验建立了两步分离纯化EGFP的色谱方法,并验证其分离纯化效果,检验EGFP的活性。首先用金属螯合亲和色谱柱HisTrap HP对EGFP的重组菌体破碎上清液进行初步分离,再用葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephadex G-10 HR对其进行脱盐纯化。采用丙烯葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephacryl S-300 HR和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测分离纯化后的EGFP纯度。最后通过荧光分光检测器和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)验证分离纯化后的EGFP是否具有荧光活性。结果表明该方法可以简便快速地分离纯化EGFP,纯度超过98%,同时保持了EGFP的荧光活性。     

水溶性卟啉在分析中的应用——Ⅰ.meso~*-四-(对-磺基苯)卟啉(TPPS_4)的合成及其与铅反应的分光光度研究

(一)光度分析的灵敏度光度分析中的灵敏度,经常是以生成的有色络合物的克分子吸收系数(ε)来表示的。常见的有机试剂与金属离子生成络合物的克分子吸收系数一般为10~4数量级。近年来有机试剂研究工作取得较大进展,ε达到10~5数量级的有机试剂已屡见不鲜。但是从理论上解释为什么有些有机试剂具有较高的灵敏度,及其与结构的关系等问题,仍然没有解决。至今,经常还是根据经典的生色团及助色团的概念,来指导有机试剂的研究。