具有真细菌基因启动子活性的古生菌DNA片段

以大肠杆菌启动子探测质粒pKK232-8 为载体,用4 组限制性内切酶分别消化古生菌盐生盐杆菌R1(Halobacterium halobium )的染色体DNA,在体外进行重组,转化E.coliDH-5α感受态细胞,得到12 个转化子(T1～T12),其抗性水平分布在10～500 m g/L的区间内. 将这些转化子所含质粒分别命名为pSX1～pSX12,限制性酶切分析表明,这些质粒各插入了一段不同的外源DNA 片段,杂交分析表明,抗性最强的转化子T11 所含质粒pSX11 上插入了一段来源于盐生盐杆菌R1 染色体的DNA 片段. 该DNA 片段在大肠杆菌中具有启动子功能.     

嗜盐古菌染色体DNA片段在大肠杆菌中的启动子功能

以启动子探针质粒pKK232-8为载体, 用微量量热法研究了源自盐生盐杆菌R1染色体的RM13 DNA片段在大肠杆菌HB101中的真细菌启动子功能, 该启动子RM13 DNA片段的大小为1000bp(碱基对), 它能启动探针质粒pKK232-8上的氯霉素乙酰水解酶基因(即:氯霉素抗性基因Cmr), 氯霉素抗性水平可达到150 mg•L－1, 抗性水平较高, 启动活性较大.研究结果表明, 在盐生盐杆菌染色体上可能存在具有双功能或多功能的启动子DNA片段, 这对系统发育、微生物遗传学和生物热化学等均有重要的意义.     

盐生盐杆菌启动子DNA片段的特征序列及其功能分析

利用启动了探针质粒pKK232－8从古菌盐生盐杆菌中分离到许多具有细菌基因启动子功能的DNA片段,对其中3个片段RM07、RM08和RM13的序列测定,发现这3个片段上均具有典型的细菌基因启动子的保守序列（－35和－10区）,其中的2个片段RM07和RM13还分别具有古菌或真核生物启动子的典型特征序列,利用大肠杆菌－酵母菌启动子探针梭载体pYLZ－2将3个片段分别导入大肠杆菌和酵母菌中,通过检测（－半乳糖苷酶活性,进一步从功能上获得了确证,这是首次从结构和功能上发现并证实了来自古菌的DNA片段上具有二界或三界生物的特征,从而为进一步揭示古菌之谜和丰富生物的 进化关系提供了新的信息和途径,并有可能为构建双功能表达载体提供新的启动子来源。此外,在所获得的3个片段上还发现了类似于细菌σ^54启动子的典型,这是否暗示古菌为了适应极端环境所进行的转录调控有关,还有待进一步的研究。