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构建大菜粉蝶Lipocalin蛋白家族中的BBP蛋白突变文库, 依据基因序列, 分别设计10条和12条引物, 通过PCR重叠延伸法得到包含随机突变蛋白BBP的基因序列, 并重组到噬菌粒载体pCANTAB5E中构建Lipocalin突变文库, 库容达到4.0×109. 以偶联分子BSA-克百威和OVA-克百威为靶分子, 采用柱式和平皿式交叉法对Lipocalin文库进行了筛选, 用竞争洗脱法洗脱特异结合活性的噬菌体. 经过3轮筛选, 从第3轮的洗脱液中随机挑选了10个重组克隆, 用Dot-blotting法检测出K7 anticalin分子能与克百威特异结合. 为研发克百威的Anticalin类检测试剂盒提供了候选分子, 也为拓宽Lipocalin文库在有害小分子检测方面的应用奠定了基础. 相似文献
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