甲基原薯蓣皂苷含量的高效液相色谱法测定

建立了测定甲基原薯蓣皂苷(MPD)含量的高效液相色谱法.以甲醇制样,采用氨基柱(200mm×4.6mm,5μm),以乙腈-水(体积比90:10)流动相等度洗脱,流速1.2mL·min-1,柱温35℃,检测波长208nm;MPD在0.1008～1.008g·L-1范围内线性关系良好(r=0.9998,n=6);精密度实验的RSD为2.4%(n=6),重复性实验的RSD为1.6%(n=5),平均回收率为98.4%.3批MPD原料的批内平均含量均不少于92.89%(n=5),批间平均含量为93.78%(n=3).     

甲基原薯蓣皂苷静脉注射给予大鼠后体内代谢物的LC-MS~n分析

采用液相色谱-多级离子阱质谱法(LC-MSn)法,检测大鼠生物样本中的甲基原薯蓣皂苷(MPD)及其代谢产物,以推测MPD在大鼠体内的代谢途径。对大鼠静脉注射给予40 mg/kg的MPD,并收集尿液、血浆、胆汁和粪便等样本,经固相萃取(SPE)净化提取后,采用Phenomenex Gemini C18色谱柱,以甲醇(B)-水(A)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min。采用正负离子检测。在生物样本中共检测到14个代谢产物。通过与对照品的色谱行为和多级质谱特征相比对,鉴定了其中6个代谢产物,分别为Protodioscin(M3),26-O-β-D-Glucopyrannosyl-(25R)-furan-5-ene-3β,22α,26-trihydroxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2 or 4)-β-D–glucopyranoside(M5),MPD(M0),Pseudoprotodioscin(M7),26-O-β-D-Glucopyrannosyl(25R)-furan-5-ene-3β,26-dihydroxy-22-methoxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranoside(M9),26-O-β-D-Glucopyrannosyl(25R)-furan-5-ene-3β,26-dihydroxy-22-methoxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside(M10)和Dioscin(M11)。根据已有对照品的质谱裂解规律,用LC-MSn法推测了另外5个代谢物。其中Protodioscin(PD)和Dioscin是两个主要的代谢产物,其对应的生成途径是MPD在大鼠体内的主要代谢途径。代谢反应总体以一相代谢为主,主要是水解脱糖,同时检出2个二相代谢产物;代谢物结构变化主要发生在糖上,母核均无明显变化。     

“仙灵骨葆”灌胃给药大鼠后吸收入血成分的HPLC-MS/MS分析

采用高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS),对中药复方制剂"仙灵骨葆"经大鼠灌胃给药后吸收入血的成分进行分析。以甲醇-乙腈(2∶1,体积比)对血清样本进行前处理,采用C18色谱柱,以乙腈-水(各含0.1%甲酸)为流动相进行梯度洗脱,选择正离子采集模式下的一级、二级质谱全扫描,对"仙灵骨葆"给药后血清、空白血清及"仙灵骨葆"制剂进行液相色谱串联质谱对比分析,根据色谱峰保留时间及质谱碎裂规律,结合文献和空白血清加入对照品的相关信息,确认了"仙灵骨葆"13个吸收入血原型成分并推测了2个代谢物,这些入血成份主要来源于淫羊藿、补骨脂、续断和知母四味组方中药,提示这四味中药可能对该复方体内发挥药效的贡献较大。上述研究可为揭示该复方在体内抗骨质疏松药效物质提供一定实验依据。     

超高效液相色谱法同时测定肿节风中6个成分的含量

建立了同时测定肿节风中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸、异嗪皮啶6个成分含量的超高效液相色谱方法。采用Waters Acquity UPLC BEH C_(18)柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm)分离,以乙腈-水(各含0.1%甲酸)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.5 mL·min~(-1),检测波长330 nm,柱温35℃;以异嗪皮啶为参照物,计算其与其余5种目标物的相对校正因子,并考察了不同色谱仪、色谱柱、流动相、流速、柱温对相对校正因子重现性的影响;通过相对校正因子计算各成分的含量,实现一测多评,同时采用外标法测定肿节风中各成分的量,并对一测多评计算值与外标法实测值进行配对t检验。肿节风中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸、异嗪皮啶分别在0.522 0~26.09,1.482~74.13,0.591 0~29.49,0.632 5~31.29,2.612~130.5,0.970 4~48.73μg·mL~(-1)范围内线性关系良好(r≥0.999 7),仪器精密度、方法重复性、样品稳定性的相对标准偏差(RSD)均不大于1.9%,平均加标回收率为98.6%~101.5%,RSD(n=6)不大于1.9%。所建立的相对校正因子重现性良好,外标法实测值与一测多评法计算值无显著性差异(P0.05),均可用于肿节风中5个咖啡酰类和1个香豆素类成分的同时定量测定。     

延迟满足策略在化学教学中的运用

延迟满足教学策略是针对学生在学习过程中出现的疑问不作及时答复,而是把评价的时间适当延迟,给学生一定的时间和自由思考的空间,利用学生期待的心理,引导学生自己去思索、探究、发现,在学生完成思考过程获得顿悟之后,再给予肯定的评价."延迟满足"相当于"欲擒故纵",先经过学生自己深入思考、相互交流,然后再得出结论.这样记忆更深刻、理解更透彻、知识掌握更牢固.延迟满足教学有利于激发学生的学习兴趣,培养学生主动探究意识、创新思维和创造能力.下面以新授课"盐类水解"第1课时为例来分析.     

柱前衍生化结合LC-MS~n分析人尿中茶碱及其代谢物

采用固相萃取结合化学衍生化的样品柱前预处理方法,利用液相色谱-电喷雾/多级质谱联用技术(LC-ESI/MSn),对人经口服给药后尿液中的茶碱及其代谢产物进行分析,探讨了茶碱、代谢物及相关衍生物的质谱裂解行为,推测茶碱在人体内的代谢途径。尿样经Bond Elute C18小柱固相萃取,收集甲醇洗脱部分在50℃下氮气吹干,以N,N-二甲氨基氯乙烷为衍生试剂进行衍生化。以Shimpack C18为色谱柱、甲醇-水-甲酸(体积比20∶80∶1)为流动相,在正离子模式下对尿样中茶碱、代谢物及其衍生化产物进行LC-ESI/MSn分析。采用上述方法,共分析鉴定了人尿中的茶碱和4种代谢物(1-甲基尿酸、1,3-二甲基尿酸、1-甲基-N-乙酰化物、3-甲基黄嘌呤),其中1种代谢物未见文献报道。在正离子模式下,茶碱及代谢物的二级质谱大多丢失18 u,28 u或57 u片段生成一系列碎片离子,而衍生化产物的二级质谱均有规律地丢失45 u片段生成一系列碎片离子。通过与未经衍生化的尿样比较发现,衍生化可明显增强茶碱、1-甲基尿酸和3-甲基黄嘌呤的质谱检测灵敏度。本研究补充了茶碱在人体内的代谢轮廓,可为灵敏检测生物样本中茶碱、代谢物及其结构类似物提供借鉴。     

两种前处理方法对LC - MS/MS测定家兔血清中淫羊藿黄酮类化合物基质效应的影响

考察了两种前处理方法对采用液相色谱-串联质谱联用法( LC - MS/MS)测定家兔血清中淫羊藿黄酮类化合物时基质效应的影响.家兔空白血清分别以乙酸乙酯液-液萃取和C18小柱固相萃取,提取前、后各自加入一定浓度的4种淫羊藿黄酮类化合物的混合对照品溶液(淫羊藿苷、淫羊藿次苷I、淫羊藿次苷Ⅱ、淫羊藿素),评价家兔血清中淫羊...