二甲基亚砜和四氢呋喃对胃蛋白酶催化动力学和分子光谱的影响

为了研究二甲基亚砜(DMSO)和四氢呋喃(THF)对胃蛋白酶(Pepsin, PP)催化活性的影响及其作用本质, 测定了在这两种有机溶剂的作用下胃蛋白酶的催化活性、 动力学参数、 紫外吸收光谱、 紫外差示光谱和荧光发射光谱的变化. 结果表明, 体积分数为9%的DMSO使PP活性提高83.4%; 而体积分数为1%的THF只能使PP活性提高3.59%. 在盐酸溶液中, PP的动力学参数Km=2.22 mg/mL, vmax=1.1×106 U/mg Pro; 在9%DMSO中, 其Km=1.50 mg/mL, vmax=0.5×106 U/mg Pro; 在1%THF中的Km=1.91 mg/mL, vmax=0.51×106 U/mg Pro. 9%DMSO强烈抑制PP分子肽键的紫外吸收, 而对芳香族氨基酸无影响; 1%THF则对PP的紫外吸收光谱影响不大. 9%DMSO和1%THF都使PP的紫外差示光谱出现明显的负吸收峰和正吸收峰. 9%DMSO使酶分子的荧光发射峰向短波方向移动1 nm; 而1%THF则对其无影响. 实验结果表明, 在9%DMSO和1%THF中, PP分子的立体构象发生了变化, 使酶分子的Km下降, 酶分子对底物的亲和力有所升高, 从而导致酶分子的催化活性有不同程度的提高.     

超声波对木瓜蛋白酶催化活性影响的机理研究

木瓜蛋白酶经适当参数的超声波处理后酶活力提高。超声处理后酶的米氏常数Km变小,最大反应速率Vm也减小。超声处理后酶的紫外吸收光谱不变,荧光发射光谱也不改变,而差示光谱出现明显的正峰和负峰。研究结果表明,超声波处理后,木瓜蛋白酶的构型没有改变,而构象发生了变化。本文讨论了超声波影响木瓜蛋白酶活性的可能机理。     

超声波对菠萝果蛋白酶活性和光谱的影响

以菠萝果为材料，用盐析法制备菠萝果蛋白酶粗酶，进一步经SephadexG-50和DEAE-纤维素柱层析纯化，其SDS—PAGE呈单一的电泳带，并获得了菠萝果蛋白酶结晶。一定参数的超声作用可以使酶活力提高，经光谱分析，超声处理后酶的吸收光谱不改变，而荧光发射峰由336nm红移到339nm，紫外差示光谱在一定的波长也呈现出明显的正峰和负峰。本文讨论了超声波影响菠萝果蛋白酶活性的机理。