采用手持式光度计的ΔI测量模式快速测定尿样中白蛋白

目前, 临床检验尿中白蛋白的方法主要为双缩脲比色法、磺基水杨酸沉淀法、白蛋白放射免疫测定法等. 这些方法的灵敏度低或者需要进行危险的放射性实验, 分析手续繁杂, 所用仪器和试剂的成本较高, 不能用于糖尿病肾病的早期诊断. 高灵敏度的手持式光度计是吉林大学研制的一种多用途仪器[1,2]. 采用高强度单色硅光光源、可变光程液芯波导吸收池等多种先进技术, 具有光强度差(ΔI)和吸光度(A)两种测量模式, 是一种非常有前途的便携式仪器. 利用高灵敏度的手持式光度计, 在前人工作的基础[3～7]上, 我们建立了一种灵敏、快速、简便的测定蛋白质的新方法, 应用于临床检验中尿样里白蛋白的测定, 获得了满意结果, 同时为家用尿蛋白监测仪的研制奠定了基础.     

含铁离子的XO/HX体系对糖类分子氧化作用的ESR研究

用自旋俘获方法直接检测含铁的黄嘌呤氧化酶／次黄嘌呤体系中由糖产生的自由基,发现该体系中除了产生羟基自由基外,还产生烷（氧）基自由基,且糖的浓度越高,体系中产生的烷（氧）基自由基也越多。这表明含铁的黄嘌呤氧化酶／次黄嘌呤体系对糖类分子有氧化作用,且糖的浓度越高,氧化作用越强,对机体的损伤越大,应用含硒抗体酶可有效清除烷（氧）基自由基,显示出很强的抗氧化能力。     

半胱氨酸在银基底表面吸附机理的拉曼光谱研究

以具有表面增强拉曼散射 (SERS)活性的银镜为基底 ,将半胱氨酸组装到银基底表面 ;主要通过调整氨基酸溶液的pH值控制该组装过程。利用表面增强拉曼散射光谱对半胱氨酸小分子在银基底表面的吸附方式、作用机理进行了详细的探讨和研究。结果表明 ,只有当溶液的pH值接近或高于等电点时 ,半胱氨酸分子才能以 -COO- Ag+形式被有效组装到银基底的表面 ,形成表面带有自由疏基 (-SH)的半胱氨酸单分子膜 ,从而为硒代环糊精以 -S-Se-键形式组装到上述组装体系的表面提供了可能。本文的研究将为利用分子光谱探索含硒酶活性机理和进一步提高酶活性奠定基础。     

桥联双β-环糊精对N-[4-(1-芘基)]丁酰-D/L-苯丙氨酸的手性识别及机理研究

利用紫外-可见吸收和荧光发射光谱, 结合非线性最小二乘法拟合曲线以及分子力学(MM2)模拟系统地研究了手性分子N-[4-(1-芘基)]丁酰-D/L-苯丙氨酸(PDP和PLP, 总称PPs)与β-环糊精(β-CD)、 2-位硒桥联双β-CD(2-SeCD)和2-位碲桥联双β-CD(2-TeCD)的包结能力大小及这3个环糊精对PPs手性识别能力的差异和识别机理. 研究结果表明, PPs不能与单疏水空腔的β-CD形成很好的包结复合物, 与具有较长桥联链的2-TeCD结合能力最强. 2-TeCD与PDP和PLP的结合常数分别为2.33×104和6.07×103 L/mol, 对PPs的手性识别比达到KD/KL=3.84, 高于2-SeCD(KD/KL=2.61). 用MM2模拟得出了PPs与这两个双环糊精形成复合物的三维结构: PPs的绝大部分位于双环糊精两个空腔之间, 但是在这两个复合物中, 苯环与芘环所成的二面角不同. 此外, PPs与这两个双环糊精作用时均存在明显的氢键相互作用, 且2-TeCD强于2-SeCD.     

GSH对两种谷胱甘肽过氧化物酶模拟物活性影响的研究

设计并合成了谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)模拟物6A,6A’-二苯胺-6B,6B’-二硒桥联-β-环糊精(6-AnSeCD). 采用双酶偶联法测定GPX的活力结果显示, 6A,6A’-二环己胺-6B,6B’-二硒桥联-β-环糊精(6-CySeCD)催化谷胱甘肽还原H2O2和枯烯H2O2的活力均比6-AnSeCD的高. 为了进一步考察6-CySeCD和6-AnSeCD与GSH之间的相互作用, 进行了分子动力学(MD)模拟和分子对接研究. 结果表明, 与GSH的结合使GPX模拟物的构象发生变化, 这种改变可能是影响桥连GPX模拟物催化活性的关键因素.     

具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的催化抗体的研究Ⅰ．谷胱甘肽特征全抗原的合成、表征及性质

用２，４－二硝基氯苯保护谷胱甘肽的巯基制出半抗原，再通过戊二醛共价反应使其与牛血清白蛋白表面的氨基结合，经超胶ＡｃＡ５４凝胶层析纯化，制备出有较强免疫原性的谷胱甘肽全抗原。用元素分析、红外光谱及核磁共振表征了半抗原的结构。电泳分析得全抗原分子量平均为８７０００道尔顿。光谱分析及圆二色谱研究表明其有较强的可见、紫外及荧光特征吸收，且抗原结构的紧密性增强。     

表面等离子体子共振传感器研究谷胱甘肽过氧化物酶模拟物与底物的结合作用

采用表面等离子体子共振(SPR)传感装置,固定入射角,以波长为变量,以CCD为检测系统,用对金有较强吸附作用的谷胱甘肽(GSH)为基底膜,研究了GSH分别与谷胱甘肽硫转移酶(GST)与小分子GPX模拟酶2-位-碲桥联-β-环糊精(2-TeCD)的动力学过程,计算得GSH与GST的结合常数为2.82×106L/mol;GSH与2-TeCD的结合常数为3.92×102L/mol。结果表明:本方法可以用来评价小分子GPX模拟酶与底物的结合程度,简便快捷,不需标记样品,可以实时监测反应过程,作用后酶与底物易于分离,分离后的酶可以继续使用等优点。     

新型兼具GPX,SOD, CAT活性的水杨醛Schiff碱衍生物的合成

以5-磺基水杨醛为母体, 经氯甲基化和硒化反应引入催化基团-SeH, 此化合物经空气氧化、Schiff碱反应以及锰螯合反应, 最终得到一种新型的水杨醛Schiff碱类谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)模拟物. 测定了该模拟物的红外光谱、核磁共振谱、质谱和抗氧化能力. 此模拟物同时兼具超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性, 水溶性好, 保护线粒体免遭氧化损伤能力强, 具有作为药物前体的潜力.     

用多克隆抗体构建的夹心免疫传感器检测心肌肌钙蛋白I

用表面等离子体子共振生物传感器构建对心肌肌钙蛋白I特异性的免疫传感器检测心肌肌钙蛋白I,并建立两种检测方法:直接法的最低检测限为2.5μg/L,基于传感膜上的夹心免疫法的灵敏度为0.5μg/L,检测范围为0.5～20μg/L,批内及批间精密度分别为3.5%～4.9%,6.1%～7.4%;用夹心法及国外试剂盒对40名健康献血者和20例急性心肌梗死患者血清心肌肌钙蛋白I水平进行检测,两者符合率为95%.     

仿硒酶研究进展

硒是人体中必需的微量元素,它与各种疾病和人类健康息息相关。硒在生物体内以硒代半胱氨酸形式表现其生理活性和功能。为了探索硒在硒蛋白中结构和功能关系并可能发展成硒相关的适用药物,人们付出许多努力来发展硒蛋白模拟化学。由于硒酶—谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）重要的抗氧化作用以及潜在的药用价值,国际上广泛开展了对它的人工模拟研究。本文对近年来硒酶模拟化学和生物学相关研究进展进行了综述。