人nov基因全长cDNA克隆、测序及其组织表达谱分析

采用特异性mRNA富集技术，从人早期胚胎中得到人nov基因(novH)的cDNA克隆，序列分析表明，该基因cDNA序列由2389个碱基对组成，包含一段长1071bp的开放阅读框(ORF)，3′端含有加尾信号AATAAA和ply(A)尾巴。Northern杂交显示，在Hela细胞和肾上腺组织中有表达的novHmRNA，大小约为2．5kb；多组织RNA点杂交分析结果进一步表明，novH基因在肾上腺和主动脉中的表达水平相对较高，在成人肾、肝、肺和小肠组织中亦有少量的表达。     

复制缺陷型人泡沫病毒载体辅助质粒pΔGP的构建及转染小肠癌细胞的研究

在人泡沫病毒原病毒全长克隆pHRSV13的基础上,缺失突变gag和pol基因,并且用SV40polyA加尾信号替代人泡沫病毒的3′LTR,构建辅助质粒pΔGP.将复制缺陷型人泡沫病毒载体质粒pGPSNI EGFP和辅助质粒pΔGP分别转染和共转染小肠癌HIC细胞系,荧光显微镜检测发现共转染pGPSNI EGFP和pΔGP的HIC细胞能够强烈表达绿色荧光蛋白,转染有复制缺陷型人泡沫病毒载体质粒pGPSNI EGFP的HIC细胞能够表达少量的绿色荧光蛋白,而转染有辅助载体pΔGP的HIC细胞不表达绿色荧光.结果证明复制缺陷型人泡沫病毒载体的构建成功,表明人泡沫病毒env基因3′端的内部启动子IP具有弱启动子的活性,并且bel基因产生的调控蛋白能够反式激活人泡沫病毒内部启动子IP和5′LTR的启动子.     

介导GAD基因的人泡沫病毒载体的构建及其应用

构建了两种新的重组人泡沫病毒载体pGPSNI—hGAD67和pGPSNI—hGAD65，分别携带人符氨酸脱羧酶（GAD）的两种同工酶GAD65和GAD67基因，并研究其在帕金森病（PD）模刭鼠丘脑底核中的表达及对帕金森病的治疗作用．RT—PCR结果表明，人泡沫病毒载体成功地介导了GAD65基因和GAD67基因在PD模型鼠丘脑底核中有效表达．动物行为检测表明，GAD65基因导入组PD模型鼠行为与对照组相比得到明显的改善（n=12，由〈0．01）．     

中国人CD59cDNA克隆、序列分析及其表达

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从中国人胚胎总ｍＲＮＡ中扩增出４２０ｂｐ人补体终末阶段同源限制因子（ＣＤ５９）的ｃＤＮＡ，序列分析结果表明，所获得的ＣＤ５９ｃＤＮＡ与文献报道中的基因序列完全一致，含ＣＤ５９全长编码区．构建了真核表达质粒，在３Ｔ３细胞中得到了表达．     

人小肠癌转移腹水细胞系HICMA的核型分析

采用ＴｄＲ同步化的方法，分析了人小肠癌转移腹水细胞系ＨＩＣＭＡ的核型，发现该细胞系染色体数目主要分布于５２～５６条之间，众数为５４条；染色体畸变复杂，在近５０％的分裂相中存在一条端着丝粒染色体，ＧＴＧ显带表明该染色体为正常５号染色体去掉整个短臂而成．对染色体畸变与细胞癌变的关系进行了讨论．     

旋流式气液分离器内流场的数值模拟

气液分离器作为制冷系统中的关键部件,其分离性能的优劣对系统有着重要的影响。为了研究旋流式气液分离器的分离性能,首先从理论上介绍了旋流式气液分离器的分离机理,列出其主要结构参数,然后基于计算流体动力学(CFD)方法,采用Gambit建模,利用Fluent软件,对旋流式气液分离器进行了模拟仿真,并对进口附近壁面速度场、不同尺寸和进出口截面流场矢量图、纵向剖面气液体积分数分布图等进行了重点分析。仿真结果表明设计是正确、合理的。     

东亚钳蝎短链K+通道毒素BmP05基因多态性分析

基于从东亚钳蝎中鉴定的低电导Ca^2＋激活K^＋通道毒素BmP05的蛋白质和前体核苷酸序列，采用5’和3’RACE（rapid amplification of cDNA ends）技术，成功地从东亚钳蝎毒腺组织中分离到了一系列与BmP05前体核皆酸序列高同源性的cDNA序列，它们含有完整开放阅读框（open reading frame，ORF），彼此同源性很高，有的突变导致编码不同氨基酸，有的只足沉默突变，基因组克降结果进一步显示，尽管来源不同个体蝎的BmP05基因组的结构相同，但它们的基因组序列片不完全一致，在第二个外显子和内含子区域发生许多突变。BmP05在cDNA水平的多态性与其在基因组水平的多态性一致。所有结果表明，东亚钳蝎的毒素基因存在个体多态性。     

人泡沫逆转录病毒介导的siRNA抑制HBV基因表达与复制

本研究采用基于PCR技术的siRNA表达方法,快速筛选到两个可以抑制HBV基因表达的siRNAs序列:S2和X1.S2和X1被克隆到人泡沫逆转录病毒(human foamy virus,HFV)载体中,构建成为分别表达S2和X1的单表达载体和同时表达S2和X1的双表达载体.将siRNAs表达载体转导入HepAD38细胞系中,多种检测分析的结果表明这些siRNA表达载体可以有效抑制多个HBV基因的表达和病毒DNA复制;并且其抑制作用是长期的,可以持续到转导后3个月.     

六方向核聚酰胺-胺树形高分子的合成及其介导的基因转移

设计、合成、表征以肌醇为六方向起始核的新型聚酰胺-胺树形高分子. 第三代至第六代树形高分子(G3~G6)能够和DNA通过电荷相互作用形成聚电解质复合物, 聚酰胺-胺树形高分子G6和荧光素酶基因(pRE Luc)形成的复合物的粒径为80~300 nm. G3~G6能介导半乳糖苷酶基因(pSV β-Gal)和荧光素酶基因有效转染HeLa和HEK293细胞. G5和G6的转染效率比聚赖氨酸高得多, 接近枝化聚乙烯亚胺(branched polyethylenimine, PEI, Mw 25 K)的转染效率. G5和G6的细胞毒性低于聚-L-赖氨酸.     

在大肠杆菌中利用反义RNA抑制乙肝病毒（HBV）X基因的表达

将乙肝病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ株完整的Ｘ基因正向重组到原核表达质粒ｐＢＶ－２２１的ＰＬ启动子下游，得到能表达Ｘ蛋白的重组质粒ｐＢＶ－ＨＢＶ（＋）；同时将Ｘ基因反向重组到原核表达质粒ｐＢＶ－２２０的ＰＬ启动子下游，得到能转录Ｘ基因反义ＲＮＡ的重组质粒ｐＢＶ－ＨＢＸ（－）．利用这两个质粒，构建出能同时转录Ｘ基因ｍＲＮＡ和反义ＲＮＡ的重组质粒ＰＥＸ．ＡＮ－ＨＢＸ，并在原核水平上，证实了反义ＲＮＡ对Ｘ基因的表达具有明显的抑制作用，从而为在真核水平上利用反义ＲＮＡ对Ｘ基因进行调控的研究提供了有利的基础．