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1.
与HBV X蛋白相互作用的细胞蛋白的筛选及其鉴定   总被引:1,自引:1,他引:0  
参考GenBank核苷酸序列库中的HBV的核苷酸序列设计合成了一对对应于HBx基因的引物,从原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者的血清中提取HBV基因组DNA作为模板,扩增HBx编码区并测定了核苷酸序列.将该编码区克隆到酵母双杂交系统的诱饵蛋白表达载体pGBKT7中,转入酵母细胞AH109,进行表型鉴定.然后通过Mating实验从已制备好用于酵母双杂交系统的肝cDNA表达文库中筛选与HBx相互作用的细胞蛋白,并用体外免疫共沉淀实验进一步验证.研究表明,分离得到的与HBx基因编码的蛋白相互作用的4种新的细胞蛋白,分别是醛缩酶B、C8α亚基、一种丝氨酸蛋白酶Hepsin和一种未知蛋白.  相似文献   
2.
对于碘化物在铂电极和热解石墨电极上的氧化行为,玻碳电极上的计时电位法均已进行了研究。锌焙烧矿中微量银的分析常采用火试金法或原子吸收光谱法,但测定值后者常高于前者。电流滴定有较好的精密度和准确度。以铂电极为指示电极电流滴定半导体材料银-镓-硫中的银已有报导。我们探讨了碘化物在旋转玻碳电极上的氧化波,并应用于锌焙烧矿中微量银的电流滴定,采用氟化铵和EDTA掩蔽干扰元素,矿样可不经分离直接滴定,方法简便。  相似文献   
3.
用AcNPV穿梭载体Ac-Bacmid与野生型BmNPVDNA共转染家蚕BmN细胞,通过同源重组得到整合了lacZ/Tn7at/miniF表达盒的BmNPVBacmid,除能在大肠杆菌/BmN细胞中穿梭复制外,还能感染BmN-PV的非允许细胞Sf9,成功地构建了BmNPV的双穿梭载体.经与重组转座质粒pFGHe转座,获得了插入gfp/HBVe融合基因的重组rBm-Bacmid(rBmGHe),在家蚕细胞中表达了既能发射绿色荧光又具有HBeAg抗原性的双功能融合蛋白.Bm-Bacmid为杆状病毒BactoBac策略增添了一个新成员  相似文献   
4.
用细菌—杆状病毒穿梭系统(Bac-to-Bac)将一套含有绿色荧光蛋白基因(gfpS65T)和完整多角体蛋白基因的表达盒转座到AcNPV-Bacmid的Tn7转座接受位点,从而构建出一种带有gfp基因和完整多角体基因的重组杆状病毒,用这一重组病毒感染细胞能稳定地形成多角体,并在紫外光照射下产生强烈的绿色荧光,以重组病毒感染粉纹夜蛾(Trichoplusiani)幼虫后,在阳光下即可看到发射绿色荧光的幼虫,在手提式长波紫外光照射下绿色荧光更为强烈,带绿色荧光的幼虫在昆虫生态学和杆状病毒流行病学等研究领域有广泛的用途  相似文献   
5.
将人的诱导型一氧化氮合成酶(hiNOS)启动子构建在带荧光素酶基因的载体pGL3-basic上, 构建成用荧光素酶为系统的启动子, 以研究载体p8.3iNOS. 结果显示, 肾母细胞肿瘤抑制因子(WT1)能够有效地抑制hiNOS启动子的转录; 且WT1的4个选择性剪接本的抑制效果有所不同, 其中WT1(-/-)在两种肝癌细胞(HepG2和Hep3B)中对hiNOS的表达均具有最强的抑制作用, 并且抑制效果具有剂量依赖性, 用Western blot检测结果进一步证实HepG2细胞中WT1(-/-)过量表达能下调hiNOS表达. 以上结果说明WT1在肝癌细胞中对人的hiNOS具有转录调节作用.  相似文献   
6.
用宿主范围扩大的重组AcNPV在家蚕中表达TNF   总被引:1,自引:0,他引:1  
用宿主范围扩大的核型多角体病毒双穿梭载体Bonpvid与重组转座质粒 pFast-TNF转座,使含有有TNF基因的表达盒插入Bonpvid的Tn7att的接受位点筛选阳性重组E.coli菌落,将提取的阳性重组子DNA分别转染家蚕BmN细胞和Sf-9细胞,获得了能表达TNF的重组病毒,SDS-PAGE和Western blot分析表明,TNF在上述两种细胞中得到表达,以家蚕作为生物反应器,将含有重组病毒的的细胞上清注射感染家蚕4龄幼虫,使TNF在蚕体表达,用BmN细胞中表达的TNF感梁肿瘤细胞,诱导细胞发生了凋亡。  相似文献   
7.
载体表达siRNA抑制HBV复制与基因表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
用载体表达siRNA的方法并通过RNA干扰达到抑制乙型肝炎病毒(HBV)的复制及其基因的表达.针对HBV的S基因选取4个靶位点,并将目的基因与荧光素酶报道基因构成快速筛选系统,从4个位点中筛选到一个有效的作用位点.用半定量RT-PCR、ELISA、Western blot和荧光定量PCR等方法对筛选到的有效位点进行了验证,结果表明,siRNA成功降解了HBVS基因的mRNA,降低了S蛋白的表达水平,有效地抑制了HBV的复制.  相似文献   
8.
用PCR技术扩增环加氧酶2(COX-2)基因的C末端777bp的片段,插入到pET-28b(+)中,构建原核表达载体.转入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导产生包涵体形式his-COX-2融合蛋白.用镍离子螫合柱(Ni—NTA)纯化融合蛋白,获得纯度较高的原核表达蛋白.纯化后的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,用ELISA及Western blotting分别检测抗体.用此抗体Western blotting检测肝癌组织中的环加氧酶2的表达.ELISA及Western blotting结果显示免疫家兔所得的环加氧酶2抗体具有很高的效价,并能够特异性的识别真核细胞中的环加氧酶2.用此抗体检测肝癌组织中的环加氧酶2的表达.证实肝癌组织中伴随有环加氧酶2的大量表达.同时所得的环加氧酶2抗体具有很高的效价和特异性,为进一步研究环加氧酶2的功能提供了条件。  相似文献   
9.
HaNPV穿梭载体的构建及绿色荧光蛋白基因在棉铃虫中的表达*朱应齐义鹏**刘德立(武汉大学病毒研究所,武汉430072)关键词棉铃虫核型多角体病毒,穿梭载体,绿色荧光蛋白基因分类号Q78,S852.65杆状病毒表达载体被广泛用于表达各种外源基因.由于...  相似文献   
10.
本研究构建UK蛋白的原核表达载体pET28-UK,转化BL21宿主菌,经过IPTG诱导、表达、纯化,获取UK蛋白,制备抗原,免疫杭州大耳白兔.经过3次免疫后心脏采血,吸取血清作为抗体.经过ELISA和免疫荧光试验验证,陔抗体町以识别机体UK蛋白.本研究为深入阐明HBx与UK蛋白的相互作用的功能性试验,以及完全阐明UK蛋白在细胞内的功能奠定了基础.  相似文献   
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