类人胰岛素原多拷贝重复基因原核表达载体的构建与表达

根据大肠杆菌密码子偏好性,优化人胰岛素原基因序列,同时用2个赖氨酸取代C链。重叠PCR扩增法克隆优化的类人胰岛素原基因,PCR扩增引物中引入胰蛋白酶酶切位点和核酸限制性内切酶识别位点。经酶切、拼接获得类人胰岛素原多拷贝基因,并构建人胰岛素原基因多拷贝原核表达载体,转化感受态大肠杆菌诱导表达融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE电泳,考马斯亮兰染色和融合蛋白染色条带光密度分析表明,含有4拷贝的类人胰岛素原重复基因序列原核表达载体的诱导表达类人胰岛素原效率最高,是单拷贝类人胰岛素基因原核表达载体表达效率的3倍左右。表达产物经质谱鉴定,确定为优化设计的类人胰岛素原,表明构建的多拷贝类人胰岛素原基因表达载体可应用于后续人胰岛素原的高效表达生产研究。     

茶树菇多糖提取方法

比较了各种单一提取法和由单一提取法组成的几种组合提取法对茶树菇多糖的提取效果。实验表明。单一提取法中，碱浸提法最佳，40g／LNaOH浸提液提取的粗、纯多糖得率高达15．99％和4．18％；组合浸提法中，依次使用“热水浸提法和碱浸提法”的组合浸提法得到的粗、纯多糖较高，分别为17．79％和4．20％，且其浸提时间较短，为理想的浸提方法。