基于裂开型核酸适体非标记荧光法检测ATP

基于裂开型核酸适体序列短、能有效降低因探针形成二级结构产生假阳性信号等优点，选择裂开型核酸适体作为特异性识别探针，核酸染料噻唑橙（TO）为信号探针，用单壁碳纳米管（SWCNTs）降低背景信号，利用“适配体-目标分子-适配体”的“三明治”夹心方式，建立了一种检测ATP的新方法。在pH 8.0的Tris-HCl缓冲溶液中，裂开成两段的ATP适体特异性识别ATP分子，生成稳定的“适配体-ATP-适配体”复合结构。单壁碳纳米管对该复合结构的吸附力较弱，因此该复合物游离在溶液中，TO与其结合而产生强荧光。当不存在ATP时，核酸适体探针以单链状态存在，可通过π-π共轭作用结合到SWCNTs表面，进而不能与TO结合，TO游离在溶液中荧光非常微弱。反应体系中ATP浓度越高，形成的“适配体-ATP-适配体”夹心识别结构复合物越多，检测到的荧光强度越大，据此实现对ATP的检测。在优化实验条件下，在最大荧光发射波长550 nm处，ATP的浓度在9.0×10-9～1.0×10-7 mol·L-1范围内与ΔF/F₀值成线性关系，r=0.996 4。该方法加标回收率为95.2%～104%，相对标准偏差（RSD）为1.02%～4.54%，检出限达到2.67×10-9 mol·L-1。该方法基于功能核酸对目标物亲合力强、选择识别性高的特点，对ATP的检测表现出很好的选择性，实验结果表明，当相对误差控制在±5%以内时，200倍的UTP，GTP和CTP均不干扰ATP的测定。另外，该方法操作简单、快速、无需标记、灵敏准确，可用于血清样品中ATP的测定，在快速检测小分子物质领域中有较好的应用前景。     

光学适配体传感器检测赭曲霉毒素A的研究进展

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)是真菌产生的次级代谢产物,性质稳定,不易去除,人体摄入后将产生严重的健康危害。数十年来,核酸适配体不断发展,成为生物传感器的重要识别元件之一,适体传感器被广泛用于生物、医药、疾病等分析检测。本文总结了用于检测OTA的经典方法和基于核酸适配体的生物传感器方法,并主要从光学适配体传感器方面阐述了近年用于检测赭曲霉毒素A的适配体传感器,并对其进行了总结和展望。     

基于适体竞争机理的溶菌酶电化学传感器

制备了基于溶菌酶适体竞争机理的信号减弱型电化学传感器,在玻碳电极上修饰羧基化的多壁碳纳米管,将带有氨基的互补适体DNA连接到多壁碳纳米管上。由于道诺霉素崁入电极上的互补DNA,而产生电化学信号,当有目标物时,适体与结合力更高的溶菌酶结合,原本的互补链解链,导致插入双链的道诺霉素脱落,电化学信号减弱。以微分脉冲伏安法测定溶菌酶,响应的范围为1～500 nmol/L,相关系数0.999,检测下限为0.5 nmol/L(S/N=3)。     

基于核酸适体修饰的纳米通道分离β-雌二醇和雌酮的研究

建立了修饰金纳米通道分离β-雌二醇和雌酮的新方法。以聚碳酸酯膜为模板,基于模板合成-化学沉积原理,在其表面及膜孔内壁均匀沉积纳米金层,得到一定孔径的金纳米通道,利用扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)等对其进行研究表征,制备得到均一、可靠的金纳米通道膜。在制备好的金纳米通道表面,通过分子自组装的方式将β-雌二醇核酸适体修饰在金纳米通道内,得到对β-雌二醇具有选择性的纳米通道。β-雌二醇较容易通过修饰后的纳米通道,而雌酮不易通过。考察了β-雌二醇和雌酮在β-雌二醇核酸适体修饰的金纳米通道的迁移特性,以此实现二者的分离。利用50 nm聚碳酸酯膜沉积金3 h,得到孔径约20 nm金纳米通道膜,在0.5 mmol/L Tris-HCl缓冲溶液(pH 7.4)中,进样池浓度为1.76×10!5mol/L的β-雌二醇和雌酮,分离度达到1.76。     

基于荧光共振能量转移的核酸适体传感器研究

基于荧光共振能量转移的原理,以修饰于核酸适体上的FAM作为能量供体,以氧化石墨烯作为能量受体,构建了荧光适体传感器,分别对不同浓度的胰岛素和多巴胺进行检测.结果表明,胰岛素的线性检测范围为0.05~10μmol/L,多巴胺的线性检测范围为1~500μmol/L,当胰岛素和多巴胺检测浓度相同时,胰岛素检测信号远强于多巴胺.对胰岛素和多巴胺分别进行特异性实验,发现该传感器对胰岛素和多巴胺有较强的特异性.说明基于荧光共振能量转移的核酸适体传感器不仅可实现多种物质的微量检测,还具有较强的选择性,在生物和医药检测领域应用前景广阔.     

非标记凝血酶阵列电化学适体传感器的研究

基于自制的集成化三阵列金膜电极,构建了一个简单、灵敏、非标记的凝血酶阵列电化学适体传感器。以聚乙烯不干胶掩膜版法结合金属溅射沉积技术,在FR-4玻璃纤维板上制作了由3个金膜工作电极、1个大面积金膜对电极和1个厚膜Ag/AgCl参比电极构成的集成化金膜阵列电极系统。以集成化金膜阵列电极作为基础电极,采用巯基自组装技术将带巯基的凝血酶适体固定在3个金工作电极表面,巯基己醇封闭后获得三阵列凝血酶适体传感器,以电活性物质铁氰化钾作为电化学探针,基于凝血酶适体和凝血酶结合前后铁氰化钾在电极表面传质的不同导致电流变化进行凝血酶的测定。采用方波脉冲伏安法,铁氰化钾氧化峰电流的变化值与凝血酶浓度在 1.52~63 nmol/L范围内呈良好的线性关系,检出限(S/N=3)为0.92 nmol/L。     

无标记型核酸适体荧光传感器检测氯霉素的含量

建立了DNA核酸适体检测氯霉素的荧光分析新方法。将前人筛选得到的80bp的氯霉素DNA核酸适体截短至40bp,实验发现截短并不影响核酸适体与氯霉素的结合能力。40bp的DNA核酸适体与另一条互补DNA链形成双链DNA,SYBR Green I荧光染料能插入双链并有强荧光发射,加入氯霉素后,氯霉素能和DNA核酸适体形成稳定的复合物,诱导DNA双链打开,SYBR Green I释放,荧光降低。实验结果显示:在10~200μmol/L范围内,荧光降低百分数和氯霉素之间有良好线性关系,检测限为6μmol/L。     

非标记夹心式电化学可卡因适体传感器的研究

设计一种基于双链核酸适体的非标记夹心式电化学适体传感器,建立简单、高灵敏度的可卡因分析方法.首先将末端巯基修饰的捕获适体探针组装在金电极表面,构建可卡因适体传感器.该传感器与目标分子可卡因和部分互补的检测适体探针作用后,在电极表面形成适体/可卡因/适体复合物.以六氨合钌为信号分子,基于单链适体和适体/可卡因/适体复合物...     

非标记型血小板衍生生长因子核酸适体传感器

合成了介孔二氧化硅负载金纳米颗粒(Au-MSN),通过壳聚糖(CHIT)将Au-MSN固定到裸玻碳电极表面,采用自组装法将带巯基的血小板衍生生长因子(PDGF)核酸适体固定到Au-MSN修饰过的玻碳电极表面,制得PDGF核酸适体传感器.以亚甲基蓝作为电化学活性嵌入剂,通过检测核酸适体与目标分析物PDGF特异性结合前后亚甲基蓝电信号的变化,实现了对PDGF的定量检测.考察了缓冲溶液的pH、扫描速度及PDGF培育时间等条件对检测结果的影响.结果表明,在pH为7.6时,该传感器的检测范围为0.1pg/mL～1μg/mL,检出限为0.03 pg/mL.该传感器制作简单、成本低廉、灵敏度高且稳定性好.     

纳米金探针检测Hg2+离子

利用Hg2+的核酸适体修饰纳米金形成探针建立了一种定量检测Hg2+离子的方法.Hg2+适体吸附在纳米金表面,使纳米金的稳定性增强,抑制氯化钠对纳米金的团聚作用.溶液中有Hg2+离子存在时,由于适体与纳米金的吸附作用小于适体与Hg2+离子的亲和作用,纳米金失去适体保护在氯化钠作用下发生团聚.溶液颜色由红变蓝,紫外-可见光谱最大吸收峰由520 nm红移至620 nm.在优化条件下,吸光度的比值(A620/A520)与Hg2+离子浓度在5.0×10-9～7.2×10-7mol·L-1范围内呈线性关系,检测限可达3.3×10-10mol·L-1.研究了K+,Ca2+等常见离子的干扰,结果表明该方法具有良好的选择性.