淀粉酶产色链霉菌TUST2中ε-聚赖氨酸降解酶的纯化和性质

分离得到产抗菌聚氨基酸--ε-聚赖氨酸菌株淀粉酶产色链霉菌TUST2,从中纯化了ε-聚赖氨酸降解酶,并对其性质进行了研究.结果表明,该酶为膜结合蛋白.为提取该降解酶,先收集菌体细胞并用超声波破碎,细胞膜部分用1.0 moL/L NaSCN溶液溶解.将粗酶液进行Sephadex G100凝胶柱层析分离.用100mmol/L磷酸缓冲液洗脱,收集活性部分.纯化后的样品用SDS-PAGE检测,酶亚基分子量约为54700.酶活力在pH=6.0～9.0间稳定,最适宜pH=7.0.酶的最适温度为30℃,在10～50℃水浴30 min酶活力未见明显下降.研究了不同金属离子对酶活力的影响,结果表明,Zn~(2+),Cu~(2+)和Fe_(3+)可分别提高酶活力29.72%,15.85%和15.08%;但Ag~(+),Hg~(2+),Co~(2+)和Mn~(2+)对酶活力有强烈的抑制作用.Ca2~(2+),K~+和Ba~(2+)对酶活力没有影响.添加4%Tween-80能提高酶活力10%,但EDTA能强烈抑制酶活力.研究结果表明,此降解酶的性质与白色链霉菌产生的ε-聚赖氨酸降解酶的性质相似.     

Nanodiamonds Used as a Platform for Studying Noncovalent Interaction by MALDI‐MS

作为一种新的,易于实现的快速分析方法,纳米金刚石被应用基于基质隔离激光解吸附电离质谱的非共价相互作用的研究中。表面覆盖有“饵分析物”的纳米金刚石被加入到含有“目标分析物”的溶液中,通过离心的方法进行分离,并用水清洗后再利用基质隔离激光解吸附电离质谱进行分析。同时,通过比较加入纳米金刚石前后的溶液的质谱图,亦可得到相关信息。这种平台可应用于分子间非共价相互作用的研究,并可进一步应用于选择性增强的基质隔离激光解吸附电离质谱分析中,一个例子就是表面覆盖聚赖氨酸的纳米金刚石在磷酸化多肽的质谱分析的应用。     

甲基橙比色法测定发酵液中ε-聚赖氨酸含量

根据Itzhaki法的原理,对比色法测α-聚赖氨酸的方法进行改进。通过考查反应体系的pH、甲基橙浓度以及无机离子等条件对ε-聚赖氨酸测定的影响,建立了一种简便准确测定发酵液中ε-聚赖氨酸含量的方法。该方法的相关系数R2=0.9993,样品回收率达98.0%以上,相对标准偏差<2%。     

基于邻苯二酚的可降解黏合剂的制备及表征

以氨基化聚乙二醇(mPEG-NH2)为大分子引发剂,制备了基于邻苯二酚[如3,4-二羟基苯丙酸(DHPPA)和3,4-二羟基苯丙胺即多巴胺(Dopamine)]的仿生黏合剂聚乙二醇单甲醚-聚赖氨酸-g-3,4-二羟基苯丙酸[mPEG-b-P(LL-g-DHPPA)]和聚乙二醇单甲醚-聚谷氨酸-g-3,4-二羟基苯丙胺[mPEG-b-P(LG-gDopamine)].用核磁共振波谱(NMR)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)和凝胶渗透色谱(GPC)等方法表征了mPEG-b-P(LL-g-DHPPA)和mPEG-b-P(LG-g-Dopamine)的结构.mPEG-b-P(LL-g-DHPPA)和mPEG-b-P(LG-gDopamine)的接枝度分别为30%和28.6%,即每个聚合物分子链上分别接上了13.5个DHPPA单体和13个Dopamine单体.剪切强度测试结果表明,mPEG-b-P(LL-g-DHPPA)更有利于黏合剂的固化并能提高黏合剂的内聚强度.     

端基含甘露糖的聚赖氨酸的合成及其聚集行为

设计合成了2种含炔基的甘露糖衍生物(A-Man和A-DiMan)及2-[2-(2-叠氮乙氧基)-乙氧基]-乙胺(N3-TEG-NH2).以N3-TEG-NH2为引发剂引发Nε-苄氧羰基-L-赖氨酸酸酐(Lys(Z)-NCA)的开环聚合,得到2种分子量不同的端基含叠氮基团的聚赖氨酸,N3-P(Lys(Z))15和N3-P(Lys(Z))35,分别与A-Man和A-DiMan进行点击化学反应得到4种端基含甘露糖的聚合物.用透射电镜研究了4种聚合物在水溶液中的聚集行为,结果表明,基于P(Lys(Z))15的2种糖聚合物聚集形成囊泡,而基于P(Lys(Z))35的2种糖聚合物则聚集形成胶束.     

PLL-PEG-PLL三嵌段共聚物的制备及DNA包覆应用

将PLL(Z)-PEG-PLL(Z)中的氨基去保护得到两端为聚阳离子的嵌段共聚物PLL-PEG- PLL, 并对与DNA结合形成的聚集体的性质进行了研究. 结果表明: PLL-PEG-PLL与DNA在水相中形成了聚离子复合物胶束; DNA与PLL通过静电作用形成核, PEG包裹在外面, 得到的聚离子复合物胶束为均一体系, 即使在化学计量点也不会沉淀, 保持着很好的流动性和稳定性, 这一点对基因治疗是很重要的; 而且随着PLL段的增加, 包覆效果更好; 聚离子复合物胶束使得DNA具有较强的核酶抗性; 大小在10~35 nm之间, 主要呈球形; 聚离子复合物胶束能够用于基因的传递, 使基因在细胞系SF9中表达出蛋白质.     

基于纳米金/聚赖氨酸修饰的丝网印刷电极免疫传感器对双酚A的灵敏检测

该文采用一次性丝网印刷碳电极为基底,利用电沉积法制备了聚L 赖氨酸/纳米金修饰电极,构建了双酚A(BPA)电化学免疫传感器。结果表明,当抗原和第一抗体的稀释倍数为1 000倍,第一抗体的孵育时间为60 min,电化学检测环境的pH值为7.4时,BPA浓度在1~250 ng/mL范围内与还原峰电流值呈线性关系,其相关系数(r2)为0.993,检出限为0.85 ng/mL。该方法具有良好的特异性、重现性、稳定性,加标回收率为98.3%~104%,说明BPA免疫传感器对实际水样中双酚A的检测具有潜在的应用价值。     

层-层自组装构建固相可降解基因传递体系的研究

近年来,随着人类对基因研究的深入,基因治疗作为一种新的手段,受到人们的广泛重视．在组织工程材料、介入医用材料和医用植入体的应用中,与传统的溶液给药方式不同,基因技术需要一种可直接作用于材料表面贴壁细胞的长效、高转染固相基因传递体系．目前,国内外研究者将蛋白质药     

基于酸-碱动态化学的超支化聚赖氨酸的合成

报道了离子型单体e-四氟硼酸盐-L-赖氨酸-N-羧酸酐(NH3BF4-Lys NCA)的合成,其化学结构和纯度采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)、核磁共振氢谱(1H-NMR)、碳谱(13C-NMR)、氟谱(19F-NMR)和飞行时间质谱(TOF-MS)进行了确认.在大于20oC时,单体中的胺基氟硼酸盐动态解离出e-胺基,原位转化为AB*型引发单体(inimer-NCA),一锅法生成了超支化聚赖氨酸氟硼酸盐.产物经脱盐处理,得到了支化度为0.34~0.53的超支化聚赖氨酸.在25~55oC聚合温度内,离子单体的开环聚合符合一级动力学,表观速率常数kp,obs从25oC的0.01 h~(-1)逐渐增大到55oC的0.11 h~(-1).采用异核单量子相干谱(1H-13C HSQC)、傅里叶变换离子回旋共振质谱(FTICR-MS)和FTIR对超支化聚合物的结构和聚合机理进行了解析.     

生物降解高分子胶束-金壳纳米结构的制备和性能研究

聚己内酯-聚赖氨酸嵌段共聚物(PCL-b-PLys)在水中自组装形成了聚赖氨酸为壳和聚己内酯为核的球形胶束.以胶束为模板,利用聚赖氨酸的胺基与金的配位作用,引导金在胶束壳层上生长,形成了胶束-金壳纳米结构(micelle@gold nanoshell).用紫外可见光谱、X射线光电子能谱、广角X射线衍射、透射电镜、动态光散射、热重分析、光热转化实验、以及体外光热杀死癌细胞实验等对金壳结构进行了结构确认和性能表征.胶束-金壳结构比原胶束增大约30%～40%,金约占总重量2/3.而且,其具有很强的近红外吸收性能和高达63%的近红外光-热转化效率.近红外激光照射10 min,可杀死约60%的宫颈癌细胞,且自身的细胞毒性低.