人血清Alpha-1-酸性糖蛋白的糖基化分析

获取真实准确的蛋白质糖基化信息是全面了解糖基化修饰生物学功能的前提.针对简单蛋白质的糖基化分析通常采用反相高效液相色谱-串联质谱技术在肽的水平上对糖基化信息进行采集和解析.本文以人血清Alpha-1-酸性糖蛋白(AGP)酶解液为对象,发展了一套简单有效的蛋白质糖基化分析方法.本方法分为三个步骤,第一步是建立糖肽的理论m/z值表;第二步是获取糖蛋白酶解液的LC-MS谱图,并将每一个色谱峰中所包含糖肽的实际m/z值与理论m/z值进行人工匹配;第三步是对每个色谱峰的糖肽结构归属进行LC-MS/MS验证.采用本方法,我们从AGP酶解液中共鉴定出172条糖肽.与单独采用Survey模式的方法相比,本方法能够显著提高糖肽的覆盖率.     

新型离子液体基质用于MALDI-MS高效离子化寡糖/糖肽

本研究发展了四种基于三羟基苯乙酮(THAP)的新型离子液体基质,即2′,3′,4′-THAP/二甲基苯胺(DMA)、2′,4′,6′-THAP/DMA、2′,3′,4′-THAP/吡啶(Py)及2′,4′,6′-THAP/Py,用于提高寡糖/糖肽在MALDI-TOF MS中的离子化效率.与传统的固体基质2,5-二羟基苯甲酸(DHB)和2′,4′,6′-三羟基苯乙酮(2′,4′,6′-THAP)相比,新型离子液体体系分析不同类型的寡糖链,均可获得更高的检测灵敏度.可使葡聚糖(dextran 1000)和环状寡聚糖β-环糊精在MALDI质谱中的信噪比提高10倍以上,RNase B的复杂寡糖链也实现了高灵敏度的检测.在糖肽分析中,2′,3′,4′-THAP/DMA离子液体高灵敏度地检测到辣根过氧化酶的7条糖肽,而2′,3′,4′-THAP作为基质时却无法检测到任何信号.     

新型聚乙烯醇系亲和吸附剂的制备及其在糖蛋白纯化中的应 …

利用已合成的聚醋酸乙烯酯－甲基丙烯酸缩水甘油酯－甲基丙烯酸烯丙酯大孔共聚物。醇解后与６－氨基正已酸反应，进一步在ＥＤＡＣ的作用下实现与间氨基苯硼酸的偶联，得到亲水性的亲和吸附剂；配基密度为０．８６５ｍｍｏｌ／ｇ干树脂，偶联效率为８９％，以云芝糖肽八方地，吸附容量为５３．７ｍｇ／ｇ干树脂，为醇解前的７．７倍。     

PSP对癌症病人化/放疗毒性反应的数据统计分析

按WHO抗癌药急性及亚急性毒性分级标准 ,对 650例化、放疗肿瘤患者分别作了治疗前后毒性反应的总分值统计。结果加服PSP组 ( 557例 )的疗后总分值为837,低于疗前的 962 ;而 93例阳性对照组 (加服鲨肝醇 )疗前总分为 157,疗后为 2 4 1,疗后总分高于疗前。用Wilcoxon两样本秩和统计法检验 ,PSP组和对照组间具有极显著差异 ,表明PSP对比、放疗药物引起的毒副反应有明显降低效应。     

糖肽的固相合成

目前糖肽的固相合成可以分为两种策略：构建单元策略和固相糖基化策略。本文对O-连接和N-连接糖肽固相合成的研究进展进行了综述。     

基质辅助激光解吸电离质谱和电喷雾电离质谱在辣根过氧化物酶糖肽结构分析中的应用

糖链结构的质谱解析是今后糖蛋白分析中的重要研究内容,其中完整糖肽的分析,由于可以同时获得糖基化位点和对应糖链的结构信息,更具有重要意义和研究前景。本工作对质谱软电离技术在完整糖肽分析中的应用进行了研究,其中包括了基质辅助激光解吸电离(matrix-assisted laser desorption ionization, MALDI)和电喷雾电离(electrospray ionization, ESI)技术。通过平行使用两种串联质谱(tandem mass spectrometry, MS/MS)分析策略: MALDI-MS/MS和ESI-MS/MS对目标糖蛋白——辣根过氧化物酶进行分析,并讨论了其互补性。结果表明,MALDI和ESI技术各有优劣,结合串联质谱分析,可获得糖肽的糖链结构信息;两条路线互补使用,在揭示蛋白质糖基化修饰(位点和结构)的研究中十分必要。     

糖肽的合成

综述了Ｎ－和Ｏ－及其它糖肽苷键的形成和糖肽的合成，包括直接缩合法和基元合成法，此外还着重介绍了糖肽中的各种保护基。     

麦胚凝集素亲和色谱富集糖肽过程中的肽键裂解

蛋白质的糖基化是最重要的翻译后修饰之一,与蛋白质结构和功能的关系密切。凝集素亲和色谱是蛋白质糖基化研究中很常用的工具,不同的凝集素可以对不同的单糖或寡糖有特异的富集作用。麦胚凝集素（WGA）由于其特异作用的糖型广泛存在而成为使用最多的凝集素之一。在本研究中,发现将WGA用于糖肽亲和富集会导致部分肽段的降解,从而导致后续的肽段序列分析的失败。本文用4种标准蛋白质对这种现象进行了验证,结果表明肽段的降解可以发生在多个位点,其中较多地发生在酪氨酸、苯丙氨酸及亮氨酸的羧基端。这一结果提示：在糖蛋白质组研究中,如果应用WGA富集糖肽并采用质谱进行鉴定,则采用半酶切或非特异性酶切的检索策略更为合适。     

质谱技术在蛋白质、多肽化学中的应用

文中介绍了几种新的质谱技术: 快原子轰击质谱(fast atom bombardment-MS, 简称FAB-MS)、串联质谱(tandem mass spectrometry, 简称MS/MS)、电喷雾电离质谱(electrospray ionization-MS, 简称ESI-MS)和基质辅助的激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time offlight MS, 简称MALDI-TOF-MS), 这几种技术的相互补充使得质谱比较有效地用于蛋白质结构测定。文中例举了几个实例说明了它们在蛋白质的分子量测定,蛋白质和多肽的纯度鉴定, 糖肽的结构测定及特殊的N-端封闭的或一般的蛋白质和多肽的顺序测定中的应用。