免标记自增强电化学发光免疫传感器超灵敏检测河豚毒素

以Nafion固定钌联吡啶Au纳米颗粒(Ru(bpy)2+3-Au NPs)于玻碳电极(GCE),借助Au—N共价键固定河豚毒素抗体(anti-TTX),通过抗原抗体的特异性结合构建了超灵敏检测河豚毒素(TTX)的免标记自增强电化学发光(ECL)免疫传感器。当目标物TTX被特异性捕获到修饰电极表面后,可以作为Ru(bpy)2+3的共反应物增强ECL信号。与共反应物存在于溶液中或标记于二抗上相比,其优点在于发光体和共反应物之间的电子转移距离更短,可有效改善电化学发光效率,降低实验成本。最佳条件下,TTX质量浓度在0.01~1 000μg·L-1范围内与ECL信号呈良好的线性关系,检出限(LOD)为0.01μg·L-1。此免标记自增强型ECL免疫传感器显示出优异的稳定性、重现性和灵敏度,对实际样品中TTX的回收率为98.0%~104.0%,表明其具有较好的实用价值。     

微波辅助碱解荧光分光光度法快速测定河豚毒素含量

建立了一种快速、简便、灵敏地测定河豚毒素的新方法。在水和异丙醇混合碱性溶液中对河豚毒素进行微波碱解,通过测定碱解产物的量来间接测定河豚毒素的含量。结果表明:C9碱的最大激发波长为380nm,最大发射波长为496 nm,其在0.1~10μmol.L-1的浓度范围内与荧光强度呈线性关系,相关系数r=0.999 1,检测限为0.05μmol.L-1,比文献报道降低近20倍。该方法快速、灵敏和准确,可用于河豚毒素的定量检测。     

固相萃取-超过滤-液相色谱/质谱联用法测定织纹螺中的河豚毒素

建立了液相色谱-质谱法测定织纹螺中河豚毒素的分析方法。匀质后的样品用0.03 mol/L乙酸溶液提取,水浴加热10 min,用Sep-Pak C18固相萃取柱净化,再用截留相对分子质量为3000的超滤管过滤。采用Insertsil ODS-3色谱柱分离,以含有30 mmol/L七氟丁酸的甲酸铵溶液(1 mmol/L)-甲醇(体积比为99∶1)为流动相,采用电喷雾离子源,选择离子监测模式检测。以保留时间和河豚毒素的二级质谱特征碎片离子予以定性确证。结果表明,在此分析条件下,可将河豚毒素及其衍生物分离,在0.01～10.0 mg/L范围内线性关系良好(r2＞0.995),检出限(以3倍信噪比为计)为2 μg/L,平均加标回收率为72.5%～80.4%,相对标准偏差为4.48%～8.87%。将该方法用于实际样品检测，在赤潮后所采集的织纹螺样品中检出了河豚毒素。     

免疫亲和柱净化-超高效亲水色谱-三重四极杆质谱联用法测定人尿液和血浆中河豚毒素

建立了测定人尿液和血浆中河豚毒素( TTX)的超高液相色谱-三重四极杆质谱联用分析方法。尿液和血浆样品经免疫亲和柱净化,以0.1%甲酸-乙腈和0.1%甲酸溶液作为流动相进行梯度洗脱,在UPLC BEH Amide柱上实现分离,正离子电喷雾多反应监测( MRM)模式检测,溶剂标准外标法定量。尿液和血浆中TTX的测量范围为0.05~400μg/L,平均加标回收率分别为92%~95%和91%~96%,相对标准偏差在3.3%~7.2%和3.9%~7.8%(n=5)之间,样品中 TTX的检出限(S/N=3)均为0.02μg/L,定量限(S/N=10)为0.05μg/L。本方法适用于尿液和血浆中TTX的中毒检测和临床监测。     

离子交换固相萃取高效液相色谱联用法检测河豚鱼中的河豚毒素

优化建立了采用混合模式阳离子交换固相萃取柱代替传统的C18固相萃取柱进行前处理,联用高效液相色谱检测河豚鱼中河豚毒素的方法.样品经合1％乙酸的乙腈甲醇(3:1,V:V)溶液提取,混合模式阳离子交换固相萃取柱(MCX)净化,5％氨水/甲醇溶液洗脱,采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-PAD)测定,外标法定量.河...     

离子色谱法定量检测酒曲发酵液中的河豚毒素

建立了一种离子色谱定量检测酒曲发酵液中河豚毒素的分析方法。样品经乙腈(含0.1%磷酸)溶液提取和阳离子交换柱净化后,采用离子交换色谱柱分离和紫外检测。在优化的条件下,酒曲样品中的河豚毒素在10～100 mg/L内呈良好的线性关系(r2=0.997),加标回收率为90%～103%,相对标准偏差小于4.9%,检出限(信噪比为3)为1.0 mg/L。结果表明,该方法能达到定量检测的目的。将该方法应用于实际样品的检测,验证了方法的可靠性。河豚毒素初步降解实验发现,随着时间的推移,酒曲中河豚毒素的含量逐渐减少,表明酒曲发酵液对河豚毒素的降解效果显著。     

亲水液相色谱三重四极杆质谱联用法快速检测尿液和血浆中河豚毒素

建立了快速检测尿液和血浆中河豚毒素的亲水液相色谱三重四极杆质谱联用分析方法.样品经乙腈沉淀、TSK-gel Amide-80亲水色谱柱分离后,采用电喷雾串联质谱多反应监测(MRM)模式检测,基体匹配标准外标法定量.尿液和血浆样品的线性范围分别为3～500 μg/L和1～200 μg/L,加标回收率分别为96%～108%和100%～105%,相对标准偏差小于9%和16%(n=6),样品的检出限分别为1.0和0.3 μg/L(S/N=3).本方法简单、快速、灵敏、特异性强.     

几种4-氨基吡啶衍生物的多级质谱裂解途径

为获得高效的海洋生物毒素河豚毒素(TTX)解毒剂,合成了一系列4-氨基吡啶类衍生物N-二异丙基磷酰化氨基酸-N-4-氨基吡啶;研究了N-二异丙基磷酰化氨基酸-N-4-氨基吡啶的多级质谱(ESI-MS/MS)裂解方式;提出了碎片离子m/z=95的裂解途径,并推测了其重排机理.结果表明,该类化合物具有相同分子量的碎片离子c/c′,是由两种母离子a或b离子裂解得到的.通过在吡啶环上引入氯原子可证实该裂解途径;而碎片离子m/z=95源于离子重排.     

织纹螺肉中河豚毒素基体标准物质研制及不确定度评定

研制以织纹螺肉为基体的河豚毒素标准物质。9家专业实验室采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）外标法对织纹螺肉中河豚毒素的含量进行联合定值。该基体标准物质特性值为（0.78±0.14） mg/kg,组间与组内均匀性良好。在4℃冷藏运输条件下,短期稳定性可达14 d。在-18℃冷冻条件下,长期稳定性可达12个月。该标准物质测量结果的不确定度主要来源于均匀性、稳定性及定值过程。本标准物质适用于水产品中河豚毒素的分析方法验证和质量控制。     

河豚毒素(TTX)及其衍生物的电子结构和构效关系及与石房蛤毒素(STX)的比较研究

对河豚毒素(TTX)及其五个衍生物进行了量子化学计算, 根据对其电子结构及相关分析研究结果, 结合其空间结构特点, 讨论了它们的活性部位、作用方式及构效关系, 发现胍基是最重要的正电中心,在与受体作用时发挥接受电子的重要作用; O(17), O(18), O(15),O(21), O(19)等氧原子是供电子的主要负电部位。对TTX与石房蛤毒素(STX)进行了电子结构和空间结构比较, 发现它们具有相似的电子结构特征, 而且主要活性部位在空间位置上基本相互对应。这表明钠离子通道阻断剂在与受体相互作用时具有共同的结构特征和作用方式, 同时也为探讨受体结构提供了有价值的信息。