胞嘧啶脱氨基化酶APOBEC3家族及其与核酸复合物结构研究进展

载脂蛋白B mRNA催化编辑蛋白APOBEC3（简称为A3）是细胞内逆转录转座子防御系统中一类家族蛋白，它通过对底物单链DNA和RNA中胞嘧啶的脱氨基化在人类的健康和疾病中发挥多种多样的作用.部分人源A3家族蛋白通过对病毒基因组中的胞嘧啶脱氨基化产生尿嘧啶，使逆转录病毒人类免疫缺陷病毒（HIV-1）基因组发生G→A碱基突变，致使HIV-1基因组不能执行正常的功能而抑制HIV-1病毒复制.作为反保护措施，HIV-1病毒利用自身的Vif蛋白（viral infectivity factor）结合人源A3蛋白，通过泛素化标记使A3蛋白降解，从而保证病毒感染.为更好理解A3蛋白催化胞嘧啶脱氨基化机制及抗病毒机制，综述了A3家族蛋白结构、它们对DNA或者RNA进行脱氨基化反应特点和它们与核酸复合物结构的研究进展，对A3家族蛋白参与脱氨基化反应的关键残基如何与核酸碱基相互作用等作了简单概括，相互作用的共同特征进行简要总结，对后期如何利用冷冻电镜技术开展全长A3蛋白相关工作做了展望.本文也部分讨论了A3蛋白如何与Vif相互作用，因此本综述对针对这些相互作用合理设计抗病毒药物有一定帮助.     

山茱萸酸性多糖FCP5-A的分离纯化与结构表征

从山茱萸中提取出水溶性粗多糖, 经柱色谱分离纯化得到一种酸性多糖组分FCP5-A. 采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定其为均一性多糖, 平均分子量为8.7×104. 经IR、GC、部分酸水解、13C NMR及甲基化分析等方法对该多糖的化学结构进行了表征. 结果表明, 该多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖及半乳糖醛酸组成, 其摩尔比为1∶5.7∶0.6∶1.2. FCP5-A为多分支结构, 由-2)Rha(1-及-4)GalA(1-构成主链, 在鼠李糖的4位存在分支; 支链主要由高度分支的阿拉伯糖构成, 此外还存在-3)Gal(1-; 末端残基为Ara(1-及Gal(1-. 结果提示, FCP5-A为一种新的山茱萸酸性分支多糖.     

1-芳酰基-4-取代吡唑甲酰基氨基硫脲和环化产物的合成及生物活性

利用1-苯基-3-甲基-5-氯-4-吡唑甲酰基异硫氰酸酯（Ⅰ）与芳酰肼（Ⅱ）的加成反应合成了系列新的酰胺基硫脲衍生物（Ⅲ），并将Ⅲ在酸性条件下进行环化反应得到2-取代吡唑甲酰基氨基-5-芳基-1，3，4-噻二唑（Ⅳ）．生物活性测定结果表明部分化合物Ⅲ和Ⅳ具有较好的除草活性．     

细胞色素b5突变体V45H NMR初步研究

通过分析在H2O和D2O中采集,DQF-COSY,TOCSY和NOESY等二维核磁共振波谱鉴定了细胞色素b5定点突变体V45H(残基Val^45突变为His^45)的大多数氨基酸残基的质子自旋系统,通过解析NOESY谱中的dNN(i,i+1),dαN(i,i+1),dαN(i,i+2),dαN(i,i+3),dαβ(i,i+3)和dβN(i,i+1)等NOE相关,完成了其序列特异性归属以及主链和侧链质子共振信号的全归属。突变体V45H的二级结构分析表明残基Val^45突变为His^45对分子的整体折叠影响不大。但是,与野生型细胞色素b5相比较,突变体V45H主链酰胺质子的化学位移指数提示突变使其血红素疏水腔的微环境受到扰动。以上实验结果为进一步测定V45H的溶液结构和分析残基Val^45在蛋白质中的作用提供了基础。     

MMP-12蛋白包涵体复性时折叠状态核磁共振图谱与荧光光谱研究

MMP-12是癌症治疗药物靶标.为了更好研制新药,需要大量制备MMP-12,但MMP-12在大肠杆菌中以包涵体形式表达.因此如何优化蛋白复性过程是大量获取MMP-12蛋白的关键.采用核磁共振、稳态荧光法、外源性ANS(8-anilinol-naphthalenesulfonic acid)荧光探针三种方法监控MMP-12变性蛋白的再折叠过程,以探究其复性折叠机制.研究发现MMP-12再折叠中点值与对应的尿素浓度几乎相等(Cm≈4,mid-point of transition).不同尿素浓度中MMP-12的二维1H-15NHSQC(heteronuclear single quantum correlation)谱图显示,尿素浓度从4mol/L降低到3mol/L是MMP-12蛋白复性折叠的关键步骤.据此我们将MMP-12蛋白复性从常规的梯度透析复性方法改进成等容透析复性法(即确保尿素从4mol/L到3mol/L的浓度变化缓慢),实现复性收率提高一倍.     

DNA骨架磷硫酰化修饰的研究进展

DNA骨架磷硫酰化修饰是指在天然DNA骨架上发现的P—O键被P—S键替换的化学修饰,属于首例生理修饰,具有磷硫修饰的DNA在Tris缓冲体系中电泳时具有DNA降解表型.研究发现DNA骨架磷硫修饰属于复制后修饰,具有如下三个特征:Rp型立体修饰,序列专一性、分布广泛性.这种修饰由五个基因组成的dnd基因簇(dndA-E)编码的蛋白控制,但这些蛋白具体的作用机制目前还不清楚.为了将来更好地研究DNA磷硫修饰机制,本文综述了DNA磷硫酰化修饰的发现历程,特点,参与DNA磷硫修饰的蛋白结构研究进展,以及磷硫修饰的DNA作为抗氧化剂研究进展.同时,对DNA磷硫修饰机制、生理功能等研究目前所面临的困难,如硫原子如何渗入DNA骨架,参与DNA磷硫修饰的五个蛋白是如何协调作用完成DNA磷硫修饰的机理等难题进行了简单概括,以为相关研究提出一些可能的方向.     

靶向肿瘤因子c-MYC基因启动区G4-DNA的小分子药物设计及核磁共振研究进展

肿瘤基因MYC在人类70%癌细胞中高表达,抑制其转录是治疗肿瘤的有效手段.c-MYC启动子区P1近端的核酸酶超敏元件Ⅲ₁(NHE Ⅲ₁)控制MYC基因近90%的转录激活.NHE Ⅲ₁区域富含碱基G序列并且形成G-四链体(G4),调控c-MYC基因转录,是抗肿瘤药物靶标.但G4-DNA和G4-RNA的三维结构高度相似,小分子与其他G4(如端粒G4、mRNA G4、c-Kit G4等)的非特异性作用会产生小分子药物“脱靶”效应,同时小分子药物会诱导其他G4形成从而干扰正常细胞的功能,造成靶向c-MYC G4抗癌药物设计困难.本文综述了近些年靶向肿瘤因子c-MYC G4-DNA的小分子药物研究进展,及核磁共振(NMR)技术在G4-DNA和G4-RNA结构确定中的作用,为靶向c-MYC G4-DNA的小分子药物设计等相关研究工作提供参考.     

(E)-5'-脱氧-5'-N【{[2-(2-苯基)乙烯基]磺酰基}氨基】腺苷的合成

以甲基磺酰胺为起始原料,经Horner和Mitsunobu等反应合成了新型核苷类衍生物——(E)-5'-脱氧-5'-N【{[2-(2-苯基)乙烯基]磺酰基}氨基】腺苷,其结构经1H NMR,13C NMR,IR和LC-MS表征。     

细胞色素b5突变体P40V血红素微环境核磁共振研究

细胞色素b5是一个具有多种重要生理功能的低自旋金属蛋白, 作为呼吸链系统的主要电子传递体之一受到了广泛的重视. 为了研究细胞色素b5表面疏水斑区Pro⁴⁰在细胞色素b5结构与功能上的重要性, 本文利用定点突变技术把细胞色素b5中Pro⁴⁰突变为Val⁴⁰, 并采用1D与2D ¹H NMR的方法对其进行分析, 探讨了Pro⁴⁰突变为Val⁴⁰对细胞色素b5血红素微环境的影响.     

Lin28特异性结合let-7 RNA结构基础

let-7 miRNA家族控制许多决定细胞命运的基因的表达,从而影响细胞的多能性、分化和转化．Lin28是一个let-7生物合成的转录后抑制因子,其碳端的锌指结构域特异性地结合一个保守的GGAG或者一个类似GGAG的let-7 miRNA模块．作者报道了人源Lin28与5′-A–2A–1G1G2A3G4-3′ let-7 RNA复合物的核磁共振结构．Lin28中两个Lin28 ZKD识别了RNA中的G1G2A3G4．复合物所有的碱基采取反式构象,RNA的骨架因为Lin28的结合变得弯曲,与之前报道的晶体结构一致而与NMR结构不同,从而进一步确认了Lin28识别RNA的作用模式．