二烯丙基聚乙二醇20M交联键合型毛细管电泳柱的制备及其评价

本将聚乙二醇２０Ｍ改性为二烯丙基聚乙二醇２０Ｍ，使其更容易在毛细管壁进行，交联和键合，采用超动态涂柱技术，实现了快速制备二烯丙基聚乙二醇２０Ｍ交联键合型毛细管电泳柱，该制柱方法具有简单，速度快，制柱重复性高的特点，用四种碱性蛋白对所制的柱进行评价，平均柱效可达５×１０＾５理论塔板数／米，每次运行之间（Ｎ＝６），天与天之间（Ｎ＝３），以及柱与柱之间（Ｎ＝３）的迁移时间的标准偏差（ＲＳＤ％）在０．２     

毛细管电泳手性分离进展*

评述了近年来毛细管电泳手性分离的进展。以各种手性选择剂的发展为线索介绍了毛细管电泳手性分离理论、方法及应用。简要说明了分离中应注意的一些关键问题。     

毛细管离子电泳法定量监测丙酮丁醇梭菌发酵过程中产生的有机酸的浓度变化

建立了一种用于监测丙酮丁醇梭菌发酵过程中产生的3种有机酸(乳酸、乙酸、正丁酸)浓度变化的毛细管离子电泳方法。该方法以对甲氧基苯甲酸为电泳缓冲液,以十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)为电渗流改性剂,采用间接紫外检测方式测定发酵过程中产生的有机酸。发酵液经过简单的离心处理后,上清液稀释后直接进样分析。考察了电泳操作条件对分离的影响,对实验条件进行了优化。优化后的分离条件为10 mmol/L对甲氧基苯甲酸（pH 5.8）、0.15 mmol/L CTAC。该方法测定乳酸、乙酸和正丁酸的定量限分别为1.22,0.38和0.58 mg/L;完成一次分析只需要5 min,并具有良好的重现性。该方法已成功地用于丙酮丁醇梭菌的代谢流量分析。     

伴刀豆凝集素修饰磁性纳米粒子富集人血清中糖蛋白及质谱鉴定

发展了一种新型的磁性纳米粒子应用于人血清中特异性糖蛋白的亲和富集。制备的磁性纳米粒子具有核/壳/壳结构,即由Fe₃O₄磁性粒子/硅胶层/有机聚合物外层构成。伴刀豆凝集素A（Con A）以共价键合的形式通过短链聚乙二醇固定在粒子表面,实现了人血清中特异性糖蛋白的高效富集。富集的蛋白经过胰蛋白酶酶解后,所得的肽段经离线的二维色谱分离,用高分辨质谱共鉴定出80种蛋白。通过NetNGlyc等搜索软件分析确定其中76种为糖蛋白,分析发现在血清中质量浓度仅为0.00001 g/L的 β -2-glycoprotein 1也得到了鉴定,表明我们发展的磁性纳米粒子与凝集素相结合的方式,可以高效地富集复杂体系中与主要蛋白成分含量相差12个数量级的低丰度糖蛋白。     

聚乙烯吡咯烷酮动态涂敷毛细管电泳柱分离碱性蛋白质

以聚乙烯吡咯烷酮(PVP)为添加剂对毛细管柱进行动态修饰,用于碱性蛋白分离。对4种碱性蛋白质进行分离,实验结果表明聚乙烯吡咯烷酮能够很好地抑制电渗流(EOF)及碱性蛋白在石英毛细管壁上的吸附作用。在pH4.0,PVP浓度(W/V)为0.4％时,EOF仅为1.35×10~(-9) m~2/V.s,平均柱效可达5×10~5理论塔板数/m。每次运行之间(n=6),天与天之间(n=6),迁移时间的相对标准偏差(RSD％)分别小于1％和3％,表明该动态涂敷方法具有良好的重现性和稳定性。另外,由于PVP的粘度较小,使得该方法操作方便、快捷。     

中药多糖及人血清中糖蛋白N-糖链的毛细管电泳指纹图谱研究

该文建立了激光诱导荧光毛细管电泳(CE-LIF)检测中药多糖和人血清糖蛋白中N-糖链的分析方法。利用8-氨基芘-1,3,6-三磺酸钠(APTS)为柱前荧光衍生试剂,结合CE分析,可在15 min内同时测定7种中性单糖。该方法应用于中药制剂和药物植物中单糖组成和含量的测定,加标回收率为88.0%~102%,相对标准偏差(RSD)小于3.0%。该方法灵敏度高、准确性好、实用可靠,适合于监控中药制剂中糖类物质的种类和含量。同时,基于毛细管凝胶电泳方法(CGE)建立了人血清中糖蛋白的N-糖链指纹图谱。利用中性涂层聚乙烯醇(PVA)有效地抑制电渗流,增加分离时间,实现了糖链异构体的有效分离。对5μL人血清进行毛细管电泳分析,共分离得到17个组分。这为进一步研究复杂生物体系血清蛋白的糖基化变化提供了可能性。     

离线二维色谱结合糖苷外切酶酶解用于IgG与人血清糖蛋白中N-糖链的结构表征

基于离线二维色谱和糖苷外切酶分析,建立了一种有效、可靠的糖蛋白N-糖链的结构鉴定方法。首先采用弱阴离子交换色谱实现不同唾液酸程度糖链的制备,随后将激光诱导毛细管电泳(CE-LIF)与糖苷外切酶相结合进行糖链结构鉴定。将分离制备后的糖链荧光标记后,进行自上而下的消化(top-down digestion)以及自下而上的结构归属(bottom-up identification),共检测到IgG中的18种糖型。将上述策略进一步应用于人血清中N-糖链的分析,发现不同唾液酸化程度糖链的相对量为S1∶S2∶S3∶S4=4.7∶20.9∶6∶1。结果表明,人血清中高丰度的中性糖链与IgG的中性糖链结构非常相似,而血清中含量最丰富的是二唾液化两天线的N-糖型FA2G2S2。该方法在糖蛋白N-糖链的结构表征中具有一定的应用潜力。     

基于化学蛋白质组学的药物靶标鉴定

通过药物靶标鉴定，可以建立药物活性与细胞表型之间的联系，阐明药物的作用机理，还可以发现药物的脱靶效应和耐药性机制，发现治疗药物的新靶点，并在药物开发的早期阶段预测可能存在的毒性，降低药物研发失败的风险。目前虽然科学技术取得了飞速发展，但是鉴定药物靶标依然是一件令人生畏的工作。本文对近10年来药物靶标鉴定方面的研究进展，特别是无化学标记的新技术进行了评述。     

美国吐伦大学的共同仪器设施中心管理模式的介绍

美国吐伦大学的共同仪器设施中心管理模式的介绍１９９５年１１月，应国家科委和中国科学院邀请，美国吐伦大学、共同仪器设施中心（ＣｏｏｒｄｉｎａｔｅｄＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎＦａｃｉｌｉｔｙ，以下简称ＣＩＦ）主任ＴｏｍＬｙｔｔｌｅ博士来我国进行学术交...