动物肌肉组织中己烯雌酚残留量的液相色谱-串联质谱法测定

建立了动物肌肉组织中己烯雌酚残留的液相色谱-串联质谱分析方法。样品用乙腈-甲酸溶液均质提取,以乙腈-水(体积比85∶15)为流动相经反相色谱柱分离后,采用多反应监测(MRM)负离子模式检测,定性离子对为m/z266.9/237.0和266.9/251.0;其中m/z266.9/251.0用于外标法定量。空白样品及其加标实验结果表明,特征离子相对强度比值稳定,无基质干扰,结合保留时间可实现准确的定性定量,方法检出限为0.10μg/kg(S/N=3),不同肌肉基质样本添加水平在0.5~5.0μg/kg时,平均回收率为82%~96%,相对标准偏差(n=6)为3.7%~6.4%。     

己烯雌酚荧光性质的研究及其分析应用

基于己烯雌酚与浓硫酸反应后的水解产物的荧光性质，建立了一种测量己烯雌酚的荧光光度分析方法．系统地研究了不同环境介质对产物荧光性质的影响，着重探讨了不同增敏剂在不同酸度下的作用机理．在比较了β－ＣＤ与ＣＴＭＡＢ的增敏作用之后指出：在强酸性条件下，β－ＣＤ的增敏效果优于ＣＴＭＡＢ；在强碱性条件下ＣＴＭＡＢ优于β－ＣＤ．并通过小分子醇对包络物荧光强度的影响对包络机理作了详细的阐述．利用本法测定片剂中己烯雌酚的含量，结果较好．     

气相色谱-质谱法同时测定饲料中6种雌激素类药物

建立了固相萃取/气相色谱-质谱法(GC-MS)同时测定饲料中己烷雌酚、己烯雌酚、双烯雌酚、雌酮、17β-雌二醇、雌三醇的检测方法。饲料样品经乙醚提取后,HLB固相萃取柱净化、衍生化后用气相色谱-质谱仪进行检测,外标法定量。结果表明,己烷雌酚在2.5~250 ng/m L,其它5种雌激素类药物在5~500ng/m L范围内具有良好的线性关系,相关系数不小于0.99,检出限为3~8μg/kg,样品的平均加标回收率为75.9%~96.3%。该方法检出限低,能够准确进行定性和定量测定,可同时测定饲料中的6种雌激素类药物。     

人工雌激素己烯雌酚酶联免疫分析方法的建立

本实验旨在初步建立人工合成雌激素己烯雌酚（DES）的酶联免疫吸附分析（icELISA）方法。实验首先合成了己烯雌酚的两种半抗原正丁酸己烯雌酚单醚（DES-CP）、乙酸己烯雌酚单醚（DES-CME）。DES-CP与牛血清蛋白（BSA）偶联作为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠并进一步制备了DES单克隆抗体，表征了单克隆抗体的亲和力和特异性。在ELISA优化的条件下，方法的抑制中浓度为 IC₅₀＝9.8 ng/mL，检测限 IC₂₀＝2.3 ng/mL，工作浓度范围为 2-42 ng/mL. 抗体与己烷雌酚、双烯雌酚的交叉反应分别为 44%, 27%，与天然雌激素雌二醇的交叉反应小于0.1%. 评估了分析缓冲液中盐离子浓度、pH、有机溶剂含量等因素对分析方法的影响。本分析方法应用于水样的添加实验，回收率符合分析精度要求。HPLC法对实验结果进行了确证，证明了ELISA应用于水样分析的可靠性。     

HPLC测定动物组织中己烯雌酚、呋喃唑酮、磺胺类药物残留

建立了用于动物组织中己烯雌酚、呋喃唑酮、磺胺甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲嘧啶、磺胺甲唑、磺胺喹啉残留测定的高效液相色谱法。样品以乙腈提取,正己烷脱脂,SPE(AluminaB)净化,分步溶剂洗脱,HypersilODSC18(4.6×250mm,5μm)进行分离,紫外检测器检测,梯度洗脱测定五种磺胺,通过波长在线切换测定己烯雌酚和呋喃唑酮。回收率在89.2%～98.6%,相对标准偏差为3.2%～5.1%,己烯雌酚、呋喃唑酮和磺胺的最低检测限分别为0.5、0.1和0.2ng。该方法已成功应用于禽类样品的兽药多残留的检测。     

中空纤维膜液相微萃取-高效液相色谱联用技术测定尿液中痕量己烯雌酚

采用中空纤维液相微萃取与高效液相色谱联用技术测定了尿液样品中的痕量己烯雌酚;考察了样品相酸度、中间相种类、接收相浓度、搅拌速度、萃取时间等对液-液-液三相微萃取效率的影响,进而确定了最佳萃取条件.结果表明,当样品相pH为2.5,中间相为甲苯,接收相为3μL 0.25mol/L氢氧化钠溶液,搅拌速度为800r/min,萃取时间为50min时,萃取效率最佳.在最佳萃取条件下,样品的回收率为76.4%,相对标准偏差为3.8%.     

ZnSe量子点增敏鲁米诺-铁氰化钾化学发光测定牛奶中的己烯雌酚

碱性介质中,ZnSe量子点能够增强鲁米诺-铁氰化钾体系的化学发光,己烯雌酚对该体系的化学发光有很强的抑制作用,据此建立了测定己烯雌酚的新方法,并对可能的反应机理进行了探讨。结果表明,在优化实验条件下,己烯雌酚在6.0×10^-9~4.0×10^-5 mol／L的浓度范围内与发光强度呈良好的线性关系,检出限为2.0×10^-9 mol/L(信噪比S／N=3)。对于浓度为4.0×10^-6 mol／L的己烯雌酚,测定11次的相对标准偏差为1.4％。将该体系用于牛奶中己烯雌酚的测定,回收率为94.47％~107.61％。     

非现场型红外光谱法在电化学检测己烯雌酚中的应用

建立了亚甲基蓝(MB)修饰多壁碳纳米管玻碳电极(MWNT/GCE)测定药片中己烯雌酚(DES)的方法,并采用非现场型傅里叶红外光谱技术(Off-site-FTIR)对亚甲基蓝修饰电极进行了表征检测.结果表明,聚亚甲基蓝在电极上的形成是由于双键断裂,使得在1603.3cm-1处的C＝N键伸缩振动吸收带消失;在0.2mol/L的磷酸缓冲液(pH=7.5)中,采用修饰电极己烯雌酚的伏安曲线出现特征氧化峰,峰电位为0.209V,峰电流显著提高,表现出明显的电催化作用;利用方波伏安法(Square Ware Voltammetry,SWV)测得峰电流与己烯雌酚质量浓度在1.0×10-5-1.0×10-9g/L范围内呈线性关系,线性相关系数0.9949,检出限5.0× 10-10g/L.用此法对己烯雌酚药片的含量进行了测定,测定结果与标示相符.     

己烯雌酚与CYP2C9的计算模拟及多光谱法研究

为了研究己烯雌酚与CYP2C9的结合作用机制,结合分子模拟,荧光光谱等光谱实验多角度分析了两者的结合情况。首先从分子对接得到己烯雌酚与CYP2C9相互作用的最佳结合构象,然后通过动力学模拟研究了己烯雌酚与CYP2C9的复合物的稳定性以及构象变化,最后用多光谱法进行实验印证。对接结果表明己烯雌酚与CYP2C9反应可以自发进行,动力学模拟结果表明两者具有较强的结合能力。同时,荧光光谱实验得出两者的结合机制为静态猝灭且形成一个结合位点,热力学参数证明两者结合作用为疏水作用力;紫外光谱实验进一步证明两者结合后的CYP2C9的构象和周围环境发生改变。通过拟合分析酰胺I带,红外定量分析结果表明,与己烯雌酚作用后的CYP2C9蛋白质的二级结构发生改变。综上结果表明CYP2C9与己烯雌酚可以发生相互作用,理论与实验进行相互印证,为进一步研究CYP2C9的催化代谢机制提供参考。     

多壁碳纳米管固载亚甲基蓝复合膜修饰玻碳电极测定己烯雌酚

提出了多壁碳纳米管-聚亚甲基蓝(MWNT/PMB)复合膜修饰玻碳电极检测己烯雌酚(DES)的方法,考察了缓冲液、pH、扫描速度等实验参数对测定的影响。在0.2 mol/L的磷酸缓冲液(pH7.0)中,DES在复合膜电极上出现了一个明显的氧化峰,峰电位在0.197 V处。与裸电极相比较,修饰后的电极能显著提高DES的氧化峰电流并降低其氧化电位,表明MWNT/PMB复合膜对DES有电催化作用。峰电流与己烯雌酚浓度在3.73×10-11~3.73×10-8mol/L范围内呈线性关系,检出限为2×10-11mol/L;用此法对己烯雌酚药片的含量进行了测定,测定结果与标示相符。