拉曼镊子分析单个苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白

应用拉曼镊子研究了来自同一亚种的两个苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)菌株的单个伴孢晶体蛋白的拉曼光谱。一束30mW、785nm的近红外激光导入倒置显微镜,形成光镊,俘获水溶液中的单个伴孢晶体蛋白,同时收集被俘伴孢晶体蛋白的拉曼信号。结果表明,单个晶体的拉曼光谱反映了晶体蛋白的分子结构和蛋白组成,得到的拉曼光谱信号更清晰、更灵敏。平均光谱和主成分分析均显示,同一亚种的H7、D4菌株的晶体蛋白的拉曼光谱比较接近。但在同一菌株内有两类不同的伴孢晶体存在,得到了群体分析方法难以得到的信息。本方法不需要复杂的纯化伴孢晶体过程,直接俘获单个伴孢晶体并收集其拉曼光谱,既可以得到群体伴孢晶体的信息,更可以得到群体内每个晶体蛋白之间的信息。     

微生态制剂中双歧杆菌的选择性检测

综述了微生态制剂中双歧杆菌选择性检测的方法及基本原理，并对各种检测方法的特点进行了评述。     

降解萘的黄杆菌ND3菌株的固定化研究

用海藻酸盐做载体，用包埋法将降解萘的黄杆菌ＮＤ３菌株固定化，对固定化菌的制备条件及固定化菌降解萘的条件作了筛选，在适宜条件下，固定化黄杆菌连续培养４８ｈ后，对萘的降解率可达９８％以上。     

聚糖联乙炔类脂肪生膜与大肠杆菌的识别作用研究

生物膜是生物进化的产物 .生物膜中的脂类 (糖脂、磷脂、胆固醇 )的组成极为复杂 ,种类繁多 ,分子结构也各不相同 ,但全部属于极性分子 ,即在分子中都含有一个亲水头部基团和一个疏水尾部基团 .它们在膜中有一定的排列方向 ,形成脂双层或微团 ,与膜的生物学功能密切相关 .糖脂在生物膜中所含的比例虽然不是很高 ,约占 2 %～ 5% ,但它在细胞间识别和分子识别过程中具有十分重要的作用 .如 GM1是所有细胞中霍乱毒素的真正受体 [1] ,幽门螺旋杆菌的配体是一些糖脂上的唾液酸 [2 ] .L angmuir- Blodgett(L B)薄膜技术 [3,4 ] 在分子水平上制…     

类球红杆菌羰基还原酶不对称催化还原性能与底物结构的关系

 将类球红杆菌 (Rhodobacter sphaeroides) 全细胞及其分离得到的羰基还原酶用于不对称催化还原多种潜手性酮类化合物, 通过比较产物的收率、ee 值、酶活力以及酶学动力学常数 Km, 探讨了类球红杆菌的催化还原性质与底物结构的关系. 结果表明, 对于类球红杆菌全细胞不对称催化还原苯乙酮衍生物, 产物 ee 值的变化遵循 Prelg 规则, 产物收率与底物苯环及侧链上取代基团的性质有关; 对于脂肪酮催化还原, 产物收率随底物链长的增加和分子量的增大而降低, 随支链数目的增加而升高, 产物 ee 值的变化也遵循 Prelg 规则. 利用羰基还原酶不对称催化还原潜手性酮类化合物发现, 对于芳香酮类化合物, 酶对 α 位为强电负性基团的底物专一性较强; 对于脂肪酮类化合物, 酶对五碳脂肪酮的专一性较高. 利用酶直接催化还原反应产物的 ee 值均为 99% 左右, 表明酶较全细胞有更高的立体选择性.     

微量热法研究鹿茸4个活性部位对肠道特征菌群生长代谢的影响

建立灵敏表征鹿茸中具有补益活性的4个部位对两种肠道特征菌群生长代谢影响的评价方法.采用微量热法,在不同给药条件作用下,以产热功率-时间曲线(热谱曲线)的特征参数(生长速率常数(k)、最大产热功率(Pmax)、达峰时间(tp)及有效率(E)等)为指标,对肠道主要有益菌(青春双歧杆菌)生长代谢程度进行客观地量化评价.挑选鹿茸促菌最强的活性部位,进一步考察该部位对病原微生物(金黄色葡萄球菌)生长抑制的作用规律.结果表明,鹿茸不同活性部位促进青春双歧杆菌生长代谢强弱顺序为:正丁醇乙醚氯仿乙酸乙酯.活性最强的正丁醇萃取液对病原微生物(金黄色葡萄球菌)抑制影响的研究表明,正丁醇萃取液在浓度大于200μg·mL-1时,对金葡菌生长具有抑制作用.且tp随药液浓度的增加而相应地延长;k,Pmax均随浓度的增加而相应地减小.微量热法具有灵敏准确、实时在线、重现性好等特点,可用于名贵药材——鹿茸的活性部位的筛选,也为药效物质的研究提供了一个新的研究思路和方法.     

光合细菌羰基还原酶不对称还原苯乙酮的研究

从本实验室筛选得到的类球红杆菌(Rhodobacter sphaeroides)中,通过超声破碎、硫胺沉淀、DEAE-Sepha-dexA-25阴离子交换层析分离得到一种较纯的依赖NADPH的羰基还原酶.对其进行SDS-PAGE电泳分析,显示一条带,测得其相对分子量约为37kD.建立了羰基还原酶催化苯乙酮反应体系并对其进行优化,得出该酶催化苯乙酮的最适反应pH值为8,最适温度为37℃,在pH值为7～9之间比较稳定,其热稳定性较低.该酶对苯乙酮的米氏常数Km和最大反应速率Vmax分别为0.26mmol·L-1和2.4μmol·min-1·mg-1,最佳反应时间为24h·催化苯乙酮的主要产物为(S)-苯乙醇,其产率为58.5%,ee值可达到99%以上,是很有前景的生物催化剂之一.对酶催化与辅酶再生体系相结合进行了初步的研究,提出了氢化酶再生辅酶与菌绿素再生辅酶体系,为今后的酶催化工业生产奠定了基础.     

转基因水稻表达的Bt毒蛋白Cry I Ab溶液构象的研究

用荧光光谱法研究了毒蛋白Cry I Ab在溶液中的构象。结果表明，pH值增大时，毒蛋白的荧光强度也增大，至pH=11时荧光强度已达最大值；甲醇、乙醇及异丙醇等有机溶剂引起毒蛋白荧光发射波长蓝移和荧光强度增大，至有机溶剂的浓度超过某一阈值后荧光发射波长不再蓝移；丙酮能完全猝灭毒蛋白Cry I Ab的荧光，丙烯酰胺能猝灭Cry I Ab86%的荧光，而KI对毒蛋白的荧光无猝灭作用，由此推断Cry I Ab的大部分色氨酸残基位于分子表面富含负电荷的区域中。     

L—天冬门酰胺微生物电极的研制

以谷氨酸棒状杆菌作为生物催化剂，与基础氨气敏电极结合制成对Ｌ－天冬门酰胺响应的微生物电极，在３０℃时选择ＰＨ＝８．５的硼酸缓冲体系，测得电极的线性范围为７．１×１０＾－５－１．１×１０＾－２ｍｏｌ／Ｌ，斜率为５１．４ｍＶ／ｄｅｃ，检测下限为２．０×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ，响应时间为４－７ｍｉｎ寿命达３０ｄ以上。     

聚乙烯醇凝胶固定化简单节杆菌的研究

研究了以聚乙烯醇（ＰＶＡ）凝胶为载体，用包埋法固定化简单节杆菌（ＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒＳｉｍｐｌｅｘ）Ｂｙ－２－１３的制备条件及固定化菌的酶的一般性质．固定化菌的最大酶活力收率可达１００％，其ｐＨ稳定性及储存稳定性均高于游离菌．固定化菌经六次重复使用，酶活力仍不低于原始活力．