抗鳗利斯顿氏菌鸡卵黄抗体制备及其活性研究

鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)是常见的水产动物致病菌.为获得高效抗 L. anguillarum卵黄抗体(egg yolk antibodies, IgY),用纯培养的L. anguillarum制备抗原,免疫蛋鸡,联用乙酸-乙酸钠稀释、(NH4)2SO4与 Na2SO4盐析、透析法由蛋黄分离纯化 IgY.对制备的 IgY进行了体内、外抑菌与吞噬调理活性研究:分别将抗L. anguillarum 的IgY、由普通鸡蛋IgY与L. anguillarum (103 CFU·mL-1)等体积混合后注射克氏原螯虾(Procambarus clarkia),计算成活率;分别将抗L. anguillarum的IgY、普通鸡蛋IgY与L. anguillarum (106 CFU·mL-1)及血细胞混合后,接种平板培养、计数.结果表明,提取的IgY浓度为8.93 mg·mL-1,每个鸡蛋可获得IgY约120 mg,抗体纯度较高,效价为1:20480;体外抑菌率为65%;能促进细胞吞噬L. anguillarum,相对吞噬率为75%;对克氏原螯虾的保护率为33.3%.     

抗迟钝爱德华氏菌卵黄抗体制备及其抑菌、吞噬调理活性分析

迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是常见人畜共患病病原.为获得高效抗E.tarda卵黄抗体(Immunoglobulin of Yolk,IgY),将纯培养的迟钝爱德华氏菌灭活,免疫蛋鸡,由蛋黄纯化IgY,用间接ELISA法检测IgY效价.对制备的IgY进行了抑菌活性检测和动物保护实验:分别将抗E.tarda IgY、普通鸡蛋IgY与E.tarda(2×10~3 CFU·mL~(-1))孵育,涂平板,菌落计数;分别将抗E.tarda IgY、普通鸡蛋IgY与E.tarda(2×108 CFU·mL~(-1))等体积混合后注射克氏原螯虾(Procambarus clarkia),记录各组成活率.检测抗E.tarda IgY的吞噬调理活性:分别将抗E.tarda IgY、普通鸡蛋IgY与E.tarda(103 CFU·mL~(-1))及小鼠血细胞混合后,接种平板培养、计数.结果发现:制备的IgY质量浓度为8.8 mg·mL~(-1),每个鸡蛋可以获得IgY约130 mg,效价为1:10 240;体外相对抑菌率为86.6%;对克氏原螯虾的平均保护率为66.7%;能促进细胞吞噬E.tarda,相对吞噬率为79.8%.     

梭子蟹乳化病的间接荧光抗体快速诊断技术

以梭子蟹乳化病的病原菌-溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)为抗原制备兔抗血清,利用异硫氰酸荧光素标记的羊抗兔血清建立了梭子蟹乳化病的间接荧光抗体快速诊断技术,并应用该技术对人工感染梭子蟹、养殖现场梭子蟹及养殖水体进行溶藻弧菌检测.结果表明:该技术检测溶藻弧菌有较高的灵敏度,最低检测量为105cfu·mL-1.人工感染24 h后,就能在梭子蟹鳃和血淋巴中检测到溶藻孤菌.现场检测显示表观有病蟹的阳性检出率为90%,表观健康蟹的阳性检出率为20%,说明间接荧光抗体技术不仅可以用于诊断已感染发病的梭子蟹,而且也可检测出带菌但病症不明显的梭子蟹.     

宁波陆源入海排污口优势菌群的数量、组成分析与研究

研究了宁波地区海域2011年3月、5月、8月、10月的排污口污水水体中可培养细菌的数量、组成及其分布, 探讨了优势菌群与当地环境的相关关系. 结果表明: 各地区细菌分布各月份性差异明显, 5月份、8月份细菌数量明显高于3月与10月, 其均值数量级能达到106 cfu?mL-1; 象山、余姚地区排污口细菌数量高于奉化、宁海、北仑地区, 细菌数量最高均值为8月份象山地区排污口(4.7×106cfu?mL-1). 优势菌群分布具有季节性分布特征: 3月份特有优势菌群为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)与海单胞菌属(Marinomonas sp.); 5月份为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、海单胞菌属(Marinomonas sp.)与弧菌属(Vibrio sp.); 8月份为泛菌属(Pantoea sp.)、弧菌属(Vibrio sp.)、肠杆菌属(Enterobacter sp.); 10月份为不动杆菌属(Acinetobacter sp.)、弧菌属(Vibrio sp.)、希瓦氏菌属(Shewanella sp.). 多维尺度分析表明: 临近海域类型与排污口类型为排污口细菌群落变化的两个关键因素.