吡啰红B为底物的氯化血红素催化荧光反应测定葡萄糖

吡红B在氯化血红素催化下可被过氧化氢氧化而使其荧光猝灭。在pH 5 .2弱酸性介质中 ,稳态催化速率由模拟酶和底物浓度决定 ,催化体系服从Michaelis Menten方程 ,用Lineweaver Burk作图法求得米氏常数 1.4× 10 - 5mol L ,最大反应速度 1.9× 10 - 6mol L·s ;催化常数 2 5 .6 /s。在最佳反应条件下 ,荧光猝灭程度F0 F与过氧化氢浓度在 0 .0～ 7.2× 10 - 7mol L范围内呈线性关系 ;检出限为 8.0× 10 - 9mol L。当与葡萄糖氧化酶联用时 ,可定量检测葡萄糖 ,线性关系为 (0 .0～ 1.0 )× 10 - 5mol L ;检出限为 3.3× 10 - 8mol L。方法用于分析人血清中葡萄糖含量 ,结果与苯酚 4 氨基安替比林法一致。     

血红蛋白模拟过氧化物酶催化反应体系的极谱分析

用极谱分析法研究了血红蛋白催化H2O2氧化邻苯二胺(OPD)的反应体系.血红蛋白具有类似过氧化物酶的功能,它能够催化OPD-H2O2的反应生成一种具有电化学活性的产物,该产物在滴汞电极上-0.64V(vs.SCE)产生一个峰形良好的极谱还原峰.优化了血红蛋白的催化反应条件和催化反应产物的极谱测定条件 在最佳条件下,该体系可用于血红蛋白含量的测定,线性范围为2.0×10-9～2.0×10-7mol/L,检测限为1.0×10-9mol/L;也可用于痕量H2O2的测定,线性范围为1.0×10-6～2.0×10-4mol/L,检测限为1.0×10-6mol/L.     

血红蛋白作为催化剂高灵敏测定过氧化氢

用血红蛋白作为过氧化物酶的替代物,用于催化H2O2氧化对甲基酚的反应体系.研究发现,血红蛋白作为过氧化物酶的替代物,其催化活性比Hemin、β-CD-Hemin等过氧化物模拟酶要高.建立了高灵敏测定痕量H2O2的荧光分析法.该法的线性范围为3.19×10-8～3.19×10-6 mol/L,检出限为8.85×10-10 mol/L.用于雨水中H2O2的测定,结果满意.     

过氧化物模拟酶催化荧光反应性能的研究——FeTMPvP-HVA-H_2O_2体系

本文研究了moso-四(N-甲基-3-吡啶基)卟啉和铁的络合物作为辣根过氧化物酶的模拟酶催化过氧化氢氧化高香草酸的荧光反应的性能。拟订了用模拟酶催化测定H_2O_2和葡萄糖的荧光测定方法。其检出下限分别为1.1×10~(-7)mol/LH_2O_2和0.2μgml~(-1)葡萄糖。对血清中葡萄糖的含量进行了测定,结果令人满意。通过动力学研究,比较了该模拟酶与辣根过氧化物酶及其它模拟酶催化活性的相对大小。     

血红蛋白模拟酶催化荧光法测定葡萄糖

建立了测定葡萄糖的血红蛋白模拟酶催化荧光法.采用斜率法,利用血红蛋白的过氧化物酶催化活性,无毒性的L-酪氨酸作为荧光底物,与 GOD催化氧化葡萄糖的反应进行偶联,成功的测定了果蔬组织液中的葡萄糖并获得了最佳实验条件.考察缓冲溶液pH和浓度对荧光斜率的影响,发现在高pH条件下采用NH3-NH4Cl溶液有荧光增强作用.干扰物质对测定H2O2的影响也进行了考察.荧光法对反应产物测定,以3倍标准偏差计算葡萄糖检出限为1.3×10-8 mol/L,线性范围为5.0×10-8～1.2×10-4 mol/L.对4.0×10-6 mol/L的葡萄糖溶液测定相对标准偏差为3.79% (n=9).本法成功地应用于果疏中葡萄糖的测定.     

基于血红蛋白的过氧化物酶特性测定其在血浆中游离态含量

基于血红蛋白 (Hb)的过氧化物酶特性 ,研究了以铬黑T(EBT)作为其氢供体底物时的酶动力学行为。实验测定了Hb作为辣根过氧化物酶 (HRP)的替代物的类酶催化米氏常数和米氏速率。对Hb催化H2 O2 氧化铬黑T的机理作了探讨。建立了测定Hb的催化动力学光度法 ,方法的线性范围为 2× 10 - 8mol/L～ 2× 10 - 6mol/L ,检出限为 3.6× 10 - 9mol/L。用于血浆中游离Hb的测定 ,结果满意。     

过氧化物酶模拟酶催化荧光反应的研究(Ⅰ)——MnTPPS_4-HVA-H_2O_2体系

首次研究了meso-四(4-磺基苯)卟啉和锰的络合物(MnTPPS_4)作为过氧化物酶模拟酶对高香草酸(HVA)和H_2O_2荧光反应的催化作用,拟订了用模拟酶测定痕量H_2O_2和葡萄糖的荧光测定方法,并对模拟酶和天然酶的性能进行了比较。用MnTPPS_4测定H_2O_2和葡萄糖的灵敏度分别可以达到8.5×10~(-8)mol/L的H_2O_2和0.5μgmL~(-1)的葡萄糖。     

四磺基锰酞菁作为过氧化物模拟酶在过氧化氢化学发光测定中的应用

以四磺基锰酞菁 (MnTSPc)作为过氧化物模拟酶催化H2 O2 与鲁米诺的化学发光反应 ,建立了测定环境样品中H2 O2 的化学发光分析新方法。该法的线性范围为 4 .0× 10 - 8～ 2 .0× 10 - 5mol L ;检出限为 6 .8×10 - 9mol L ;对 1.0× 10 - 6 mol L的H2 O2 进行连续 10次平行测定 ,相对标准偏差为 2 .4 %。用本法对天然雨水进行了分析测定 ,结果良好。     

辣根过氧化物酶催化过氧化氢氧化隐性亮绿显色反应的研究

以隐性亮绿 (RBG)为氢供体底物 ,研究了辣根过氧化物酶 -H2 O2 -RBG显色反应体系的酶催化特性。在 p H 5.0～ 6.0的条件下反应形成的酶催化产物亮绿 (BG)于 63 0 .6nm处有最大吸收 ,该显色反应测定 H2 O2 的表观摩尔吸光系数为 5.64×1 0 4 L·mol- 1·cm- 1,线性范围为 3 .55× 1 0 - 8～ 6.0× 1 0 - 6 mol/ L,检出限为 3 .55×1 0 - 8mol/ L。方法用于雨水中痕量 H2 O2 的测定 ,结果满意     

极谱催化波法测定苯甲醛

在磷酸盐缓冲溶液中 ,苯甲醛与联氨反应生成的产物苯甲醛腙在K2 S2 O8存在时于 - 1.2 2V(vs.SCE)产生一灵敏的极谱催化波。基于此 ,拟定了测定痕量苯甲醛的新方法。在 8.0× 10 -2 mol/LKH2 PO4 NaOH(pH 8.0± 0 .2 ) 2 .5× 10 -2 mol/L联氨 - 3.5× 10 -2 mol/LK2 S2 O8底液中 ,极谱催化波峰电流与苯甲醛浓度在 1.0× 10 -9～ 6 .2× 10 -8mol/L范围内呈线性关系 ,比无K2 S2 O8存在时灵敏度提高约 6 0倍。本方法适用于生活污水中苯甲醛含量的测定     

Glucose

Ohne Zusammenfassung     

Immobilized Glucose Oxidase in the Potentiometric Detection of Glucose

Previous work has shown that glucose oxidase can be immobilized on platinum to give an electrode that responds potentiometrically to glucose over the clinically useful range of about 10-250 mg glucose/100 mL. The present studies were carried out with electrochemically pretreated platinum and with gold or porous graphite substituted for the platinum support. The presence of the enzyme gave a significantly enhanced potentiometric response over that obtained with the bare support for both the pretreated platinum and the porous graphite, but not with gold. However, with platinum the potentiometric response became more negative with increasing glucose concentration. With porous graphite, the potential changed in the positive direction as the glucose concentration was increased. Hysteresis was demonstrated for the platinum-enzyme electrode. Mass transfer measurements with a rotating ring-disc electrode (RRDE) showed measurable diffusional resistances to the transport of a model electroactive compound (potassium ferrocyanide) through a matrix of immobilized enzyme attached to the disc of the RRDE. These results are part of a larger study to define the source of the potentiometric response by examining the roles of the support and the mass transfer resistances through the immobilized enzyme matrix.     

Glucose Biosensor Using Glucose Oxidase Immobilized in Polyaniline

A biosensor for glucose utilizing kinetics of glucose oxidase (EC 1.1.3.4.) was developed. The enzyme was immobilized on polyaniline by covalent bonding, using glutaraldehyde as a bifunctional agent. The system showed a linear response up to 2.2 mM of glucose with a response time of 2.5–4.0 min. In addition, the immobilized enzyme had a higher activity between pH 6.5 and 7.5. The system retained 50% of its activity after 30 d of daily use. The optical absorption spectra of the polyaniline/glucose oxidase electrode after glucose had been added to the buffer solution showed that the absorption band around 800 nm had changed considerably when glucose was allowed to react with the electrode. This optical variation makes polyaniline a very promising polymer for use as a support in optical sensor for clinical application.     

Mediated Bioelectrocatalytic Oxidation of Glucose on a Glucose Oxidase-Containing Composite

A composite material, which includes glucose oxidase (GOD), finely divided colloidal graphite, ferrocene, and Nafion, is developed and investigated. Kinetic parameters of redox conversions of GOD and flavin adenine dinucleotide, which is present in the active center of GOD, indicate that GOD in the composite retains molecular integrity and enzymic activity. Ferrocene in the composite undergoes reversible oxidation and is reduced on the electrode. Bioelectrocatalytic oxidation of glucose on the composite occurs via a mediator path, and the half-wave potential of a polarization curve recorded on the electrode in the presence of glucose coincides with the redox potential of ferrocene, which is equal to 0.32 V (Ag/AgCl). Effect of the ferrocene amount in the composite and the glucose concentration in the bulk solution on the glucose oxidation is studied. The results are used to optimize the composite's composition to ensure a stable operation of the enzyme electrode and effective glucose oxidation.     

纳米金葡萄糖氧化酶修饰电极对葡萄糖的电化学行为研究

利用自组装技术固定化酶稳定的优点,及纳米金的高灵敏电催化作用制备了纳米金修饰葡萄糖氧化酶修饰金电极.结果表明,制备的修饰电极对葡萄糖具有很好的电催化氧化功能.在选择的条件下,修饰电极对葡萄糖在0～28 mmol/L浓度范围内呈线性响应,响应时间为15 s,检出限为0.27 mmol,响应电流的平均密度为33.52 nA/cm2,两周后响应值保持88%,可满足实际应用要求.     

壳聚糖-Cu^2＋复合物膜固定葡萄糖氧化酶用于葡萄糖传感

利用壳聚糖(CS)对Cu2 的配位吸附作用,制得壳聚糖-Cu2 复合膜修饰电极,进一步通过Cu2 与蛋白质的配位作用,再将葡萄糖氧化酶(GOD)固定在金电极上制得GOD-Cu2 -CS/Au电极.该酶电极检测葡萄糖的线性范围为0.03～2.5 mmol·L-1,线性相关系数为0.997,检出限(S/N=3)为1 μmol·L-1.以电化学石英晶体微天平(EQCM)技术监测了各修饰过程.     

壳聚糖固定化葡萄糖氧化酶生物传感器测定葡萄糖的含量

应用壳聚糖将葡萄糖氧化酶固定于鸡蛋膜上,结合氧电极制得葡萄糖传感器.实验表明,壳聚糖比戊二醛能更好地固定葡萄糖氧化酶,最佳条件为壳聚糖浓度0.3%、固定化酶量0.8 mg、 pH 7.0、缓冲溶液浓度300 mmol/L和温度25 ℃.本葡萄糖传感器的线性范围为0.016～1.10 mmol/L;检出限为8.0 μmol/L(S/N=3), 响应时间<60 s,有很好的稳定性,寿命>3个月.同一个传感器重复使用以及同方法制作的不同传感器之间都有很好的重现性,RSD分别为2.5%(n=10)和4.7%(n=4).实际样品中可能存在的烟酰胺、 VB6、 VB12、 VE、Ca2+、 Mg2+、 K+和Zn2+等对葡萄糖的测定不产生干扰.本传感器已成功地应用于市售饮料中葡萄糖含量的测定.     

酶法测定葡萄糖

利用已糖激酶、６－磷酸葡萄糖脱氢酶偶联而催化葡萄糖反应的原理,通过还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的吸光度变化率得出 酶促反应速度,采用标准曲线法了葡萄糖的含量。检出限为７×１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ。     

葡萄糖氧化酶共价交联于蛋膜上的葡萄糖传感器

以牛血清白蛋白－戊二醛为交联剂，将葡萄糖氧化酶固定地鸡蛋膜上，氧电极作电化学敏感元件，制成葡萄糖氧化酶电极。传感器的响应范围为４．０×１０＾－６－２．４×１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ；检测限为１．２１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ。该传感器具有线性范围宽，灵敏度高，使用寿命长等优点。     

Nad Determination By Using A Glucose Dehydrogenase Based Glucose Probe

Abstract

This study describes the determination of NAD by using a glucose based enzyme carbon probe. Linear sweep voltammetric and constant potential studies were carried out in order to choose the best parameters for NAD analysis. The enzyme GDH has been used in solution first and then immobilized on the probe surface. Results indicate NAD can be detected in concentrations of 10^?6 Mol/1 with a good precision.