首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
    检索          
共有20条相似文献,以下是第1-20项 搜索用时 156 毫秒

1.  结直肠癌组织中K-ras基因突变的毛细管电泳检测  
   石冬琴  王荣  谢华  田薇  贾正平  郭建魁《色谱》,2013年第31卷第6期
   通过对PCR扩增的76例结直肠癌组织及癌旁正常组织DNA基因组共152个样本纯化变性后,采用毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)结合单链构象多态性(SSCP)分析方法检测了人结直肠癌组织及癌旁正常组织中K-ras基因第12/13位密码子突变。所检测的76例结直肠癌患者中有30例患者存在基因突变,并对异常片段进行测序验证,测序证实以碱基G→A点突变为主。结果表明所建立的CE-LIF技术结合SSCP分析检测K-ras基因突变的方法高效、快速、灵敏、准确,适合于临床上大样本结直肠癌中K-ras基因突变分析,对选择抗结直肠癌药物有一定的指导作用。    

2.  自制试剂盒在基因突变检测中的应用  
   赵春霞  许国旺  石先哲  马坚妹  张岩  吕申  杨青《中国科学B辑》,2003年第33卷第6期
   利用自制试剂盒, 在ABI 310型遗传分析仪上建立了单链构象多态性分析、单链构象多态性/杂合分析及SNaPshot分析的基因突变检测方法, 并将其应用于31例大肠癌病人P53基因外显子7-8和k-ras基因外显子1的突变筛查. 结果表明, 在各自的优化条件下, 用自制试剂盒比用商品化的试剂盒分析时间更短, 分离性能更好. 对实际样品的检测结果表明, P53基因外显子7-8和k-ras基因外显子1在被检测人群中的突变频率分别为24%和26%, 均为单点突变, 其中大部分样品的突变发生在单个基因, 只有一例样品同时在两个基因发生突变, 这说明肿瘤的发生发展有多种途径, 而且与多个基因的突变相关.    

3.  毛细管电泳检测肺癌基因突变的方法学研究  被引次数:2
   辛晓婷  王荣  贾正平  谢华  高岚  刘勇  刘圆圆  马骏  王娟《分析测试学报》,2009年第28卷第4期
   建立了一种毛细管电泳快速高效检测聚合酶链反应(PCR)扩增产物以及限制性内切酶酶切产物的方法,使其更好地用于基因诊断.以聚环氧乙烷(poly(ethylene oxide),PEO)为筛分介质,用涂层的毛细管柱(37 cm×75 μm,有效长度27 cm)分离pUC19 DNA/MspⅠ(HpaⅡ) Marker标准DNA片段.考察了筛分介质的质量浓度、pH值、毛细管柱的温度和运行电压.在1×TBE (pH 8.2)电泳液、电压15 kV、温度15 ℃,于10 min内成功分离了Marker标准DNA片段.该方法快速、灵敏、准确,用于临床76例肺癌患者正常组织和肿瘤组织p53基因和ras基因点突变情况的检测,结果满意.    

4.  毛细管电泳法检测胃癌APC基因第十一外显子的杂合缺失  
   谢希晖  王荣  谢华  贾正平  张爱梅  孟宪栋  马骏《分析测试学报》,2011年第30卷第5期
   采用聚合酶链反应(PCR)扩增了胃癌及癌旁正常组织中APC基因易发生杂合缺失的第十一外显子的部分碱基序列,扩增样品分别经96 ℃变性和RsaⅠ酶切处理,以毛细管电泳(CE)-单链构象多态性(SSCP)、CE-限制性片段长度多态性(RFLP)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)-SSCP对其杂合缺失情况进行检测。PAGE凝胶浓度为15%。CE检测条件:以3.0%聚环氧乙烷(PEO)为筛分介质,1×TBE(pH 8.2) 为电泳缓冲液,分离电压15 kV,温度15 ℃,结合激光诱导荧光(λex=488 nm,λem=520 nm)检测。不同方法的检出率由高到低分别为:CE-SSCP(30%)>PAGE-SSCP(25%)>CE-RFLP(20%)。并证实了APC基因易发生杂合缺失在胃癌组织中的突变率高于10%,且CE-SSCP方法较PAGE-SSCP和CE-RFLP的检出率高。CE-SSCP检测方法具有快速、灵敏度高等优点,可为建立简便可靠的胃癌临床早期诊断方法奠定基础。    

5.  毛细管电泳-限制性片段长度多态性分析检测胃癌H-ras基因点突变  被引次数:2
   刘圆圆  王荣  贾正平  郭志强  辛晓婷  谢华  马骏  王娟  李文斌《化学学报》,2009年第67卷第4期
   建立一种毛细管电泳快速高效检测限制性内切酶酶切产物的方法, 使其更好地用于基因诊断. 以甲基纤维素(Methyl cellulose, MC)为筛分介质, 用pUC19 DNA/Msp I (Hpa II) Marker标准DNA片段为实验对象, 通过考察筛分介质的浓度、pH值、毛细管的温度和运行电压优化出分离小于600 bp的双链DNA片段的最适条件, 并将此方法应用于临床59例胃癌患者肿瘤组织H-ras基因12位密码子点突变情况的检测. MC是一种良好的筛分介质, 运用其进行毛细管电泳对于遗传性疾病的诊断将更加快速、准确、简便、灵敏.    

6.  毛细管电泳与MFOLD软件研究单链脱氧核糖核酸分离二级结构  被引次数:3
   贾海  王荣  贾正平  陈巧云  谢华  马骏  敖燕《分析化学》,2007年第35卷第9期
   从Gene Bank数据库中下载质粒基因序列,用DNAssist软件分析并最终建立了单点碱基突变模型,并以此为研究对象对单链DNA分离机理进行研究探讨。采用高效毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)方法,以线性聚丙烯酸胺为筛分介质对模型进行分离分析,并与MFOLD软件所预测的单链二级结构进行对照分析。分离条件为:线性聚丙烯酸胺浓度为6%,负极进样,13kV分离,温度为19℃,λem=488nm、λex=520nm。结果发现毛细管电泳实际分析结果有4个单链峰,而MFOLD软件预测的只有3种二级结构,预测的准确度为75%,MFOLD软件虽然有局限性,但预测DNA二级结构仍有一定的参考价值。    

7.  基于热阻梯度加热系统的温度梯度芯片毛细管电泳用于DNA突变检测  
   徐章润  李娜  张惠丹  樊晓峰  方瑾《高等学校化学学报》,2010年第31卷第4期
   建立了一种简单、可靠的空间温度梯度芯片毛细管电泳DNA突变分析系统, 制作了热阻呈梯度均匀变化的硅橡胶(PDMS)基片, 利用其热阻变化对热传导的影响, 在基片表面形成稳定的空间温度梯度. 通过改变PDMS基片的厚度差, 可得到范围不同的温度梯度, 且形成的温度梯度在6 h内保持稳定. 利用该温度梯度加热装置对玻璃微流控芯片进行加热, 在10 ℃温度梯度范围内对209 bp的DNA突变标准样品进行分离检测, 单次样品分析时间为8.3 min, 并成功用于3例大肠癌患者石蜡组织切片中K-ras基因突变的检测.    

8.  毛细管电泳-限制性片段长度多态性快速检测胃癌组织中P53基因点突变的方法  被引次数:2
   陈巧云  王荣  贾正平  王业秋  刘圆圆  谢华  马骏《分析化学》,2007年第35卷第9期
   为建立毛细管电泳快速高效检测小于70bp双链DNA的方法。对毛细管电泳过程中的各参数进行了考察,最终得到最佳分离体系(筛分介质浓度8%,添加剂甘露醇浓度8%,pH6.5,温度15℃,电场强度275V/cm),并将该体系用于临床59例胃癌患者肿瘤组织基因248位、249位密码子点突变情况的检测,30min之内同时检测了两个密码子位点的突变情况,实现了35bp和40bpDNA片段的基线分离,且分离度较高(1.642),初步建立了快速、高分辨诊断胃癌的方法。    

9.  微流控芯片电泳激光诱导荧光检测p53外显子上的突变点  
   李钢  葛淑丽  王清江  何品刚  方禹之《分析试验室》,2010年第29卷第12期
   利用单链构象多态性(SSCP),建立微流控芯片电泳(ME)联合激光诱导荧光检测(UF)技术,检测人类p53基因点突变的方法.设计不同碱基长度的p53单链序列,针对易突变的外显子7,8,9进行SSCP分析,分离野生与突变的单链DNA序列;研究了筛分介质聚乙烯基氧化物(PEO)的浓度,场强对惑片电泳行为的影响.在PEO质量分数为0.5%,分离场强为260V/cm时,100 s之内就可以实现样品p53外显子7,8,9的野生型与突变型碱基的分离检测.    

10.  实时荧光等位基因特异性扩增法快速检测K-ras癌基因点突变  
   朱德斌  邢达  李贤  张岚《高等学校化学学报》,2007年第28卷第6期
   将荧光定量PCR技术与等位基因特异性扩增(Allele specific amplification, ASA)方法相结合, 发展了一种可以快速检测基因点突变的实时荧光等位基因特异性扩增(Real-time ASA)方法. 将该法用于检测K-ras癌基因第12位密码子发生的点突变, 分别采用针对其不同点突变方式(GAT, GTT, CGT)设计的突变型引物对待测样品进行ASA, 只有突变型样品能被顺利扩增出双链DNA产物, 该产物才能与双链DNA染料SYBR Green Ⅰ结合, 发出荧光信号从而被检测到. 用该法检测31例结肠癌组织中的K-ras癌基因点突变, 其中有15例样品检出为突变型. Real-time ASA法可检测到样品中含量为1/1000的突变型基因, 具有灵敏、快速、简便、安全、高通量和低成本等优点, 可望用于大量临床样本的点突变筛查.    

11.  毛细管电泳——基因突变及多态性分析新方法  被引次数:4
   任吉存《分析化学》,2001年第29卷第4期
   着重介绍基因突变及多态性分析方法以及毛细管在电泳在该领域中的应用。主要包括单链构象多态性分析,变性梯度及温度梯度电泳,杂合子分析,限制性片段多态性分析,等位基因特异性扩增,核酸杂交,引物扩展及小卫星和微卫星分析。    

12.  未修饰的纳米金结合等位特异性扩增来检测K-ras基因点突变  
   周政  朱德斌  邢达《化学学报》,2006年第64卷第12期
   将等位基因特异性扩增的特异性与纳米金特殊的光学性质相结合, 发展了一种新的基因点突变检测方法. 以肿瘤中常见的K-ras癌基因第12位密码子作为点突变检测对象, 采用突变型引物对待测序列进行等位特异性扩增. 突变型样品扩增产物中大部分是双链DNA; 而野生型样品由于不能被顺利扩增, 产物中大部分是单链DNA. 以纳米金颗粒作为报告基团, 向两种不同基因型扩增产物中依次加入纳米金胶和盐溶液, 野生型基因扩增产物中的单链引物被吸附到纳米金颗粒表面, 使得纳米金在适宜浓度的盐溶液中不发生聚集; 突变型样品扩增产物中的双链DNA由于与纳米金颗粒间存在静电斥力而不能被吸附到纳米金颗粒表面, 纳米金在该浓度的盐溶液中发生聚集, 导致两种基因型的混合液在吸收光谱和颜色方面均存在显著差异, 从而实现了检测基因点突变的目的. 该检测方法直观、快速、简便, 实验成本低, 能够检测到pmol量级的样品, 为点突变检测提供了一种实用的新方法.    

13.  多态性及基因测序分析方法研究苯丙酮尿症患者的基因突变  
   王春艳  张雯艳  皮子凤  刘志强  宋凤瑞  刘颖  李振来《分析化学》,2011年第39卷第12期
   应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析及基因测序的方法,分析35例苯丙酮尿症患者PAH基因第6和7外显子以及其两侧部分内含子序列,进行了突变的筛查和确定。研究吉林地区苯丙酮尿症人群中苯丙氨酸羟化酶(Phenylalanine hydroxylase,PAH)基因突变特征。结果显示:(1)在70个PAH等位基因中共检测出9种不同突变基因,总检出率为44.2%。吉林地区常见的突变是R243Q和EX6-96A>G,其它较常见突变有IVS7+2T>A,R241C,L242F,G247R,G247V,R261X和R176X。(2)检测出两种多态性位点Q232Q和V245V,推测PAH基因cDNA序列存在人种差异和地域差异。明确了吉林地区PAH在第6和第7外显子基因及其两侧部分内含子突变类型与中国其它地区相似,高频率突变位点基因突变比例几乎一致,而其它突变位点的基因突变比例存在明显差异。    

14.  高效毛细管线性聚丙烯酰胺凝胶电泳柱的制备、柱性能表征及操作条件考察  被引次数:4
   施维  张玉奎  陈农  张津  王磊  邹汉法《分析化学》,1998年第1期
   发展一种简便快速的线性聚丙烯酰胺毛细管凝胶电泳(CGE)柱的新型制备方法,用于分离Poly dA(40~60)和双链DNA,柱效达 6百万理论板/米。提出“筛分能力”作为 CGE柱评价指标,对样品迁移行为随操作条件的变化规律进行考察,为毛细管凝胶电泳的理论研究和实验条件优化奠定了基础。    

15.  高效毛细管线性聚丙烯酰胺凝电泳柱的制备,柱性能表征及操作条件考察  被引次数:8
   施维 张玉奎《分析化学》,1998年第26卷第1期
   发展一种简便快速的线性丙聚丙烯酰胺毛细管凝胶电泳柱的新型制备方法,用于分离PolydA(40-60)和双链DNA,柱效达6百万理论板/米。提出“筛分能力”作为CGE柱评价指标,对品迁移行为随操作条件的变化规律进行考察,为毛细管凝胶电泳的理论研究和实验条件优化奠定了基础。    

16.  电化学发光PCR定量检测H-ras癌基因点突变  被引次数:2
   朱德斌  邢达  沈行燕  刘晋峰《高等学校化学学报》,2005年第26卷第7期
   提出了一种电化学发光PCR(ECL-PCR)分析方法,该法可用于定量检测基因点突变.其检测H-ras癌基因PCR扩增产物的灵敏度可达100fmol;线性范围为0.1-500pmol.用ECL-PCR分析法对膀胱癌组织中H-ras癌基因进行突变检测,只需要10μL样品,20min的孵育时间和30s的采集时间,得出20例膀胱癌样品中有7例存在点突变,通过标准曲线方程定量计算出突变样品的量.ECL-PCR分析方法在灵敏度、线性范围、分析时间等方面都优于传统的检测方法,是一种安全、快速、灵敏、定量检测基因点突变的分析方法.    

17.  毛细管电泳-激光诱导荧光鞘流检测系统优化研究及在基因分析中的应用  被引次数:2
   陈林  任吉存《分析化学》,2003年第31卷第12期
   对自组装的毛细管电泳 激光诱导荧光鞘流检测装置进行了系统的优化。探讨了鞘流速度、激光功率和检测的位置对检测信号的影响以及鞘流速度与峰面积和理论塔板数的关系。在优化的条件下 ,对荧光素检测的线性范围为 1× 1 0 - 8~1× 1 0 - 1 0 mol L;检出限为 7.5×1 0 - 1 1 mol L(S N =3 )。使用聚N ,N 二甲基丙烯酰胺 (PDMA)为双功能非胶筛分介质 ,将毛细管电泳 激光诱导荧光鞘流检测系统成功地用于DNA片段及基因PCR扩增产物分离检测。    

18.  线性聚丙烯酰胺和聚乙烯吡咯烷酮准互穿网络聚合物溶液用于毛细管电泳紫外检测条件下分离DNA片段的深入研究  
   王前 许旭 戴立信《中国化学》,2006年第24卷第12期
   线性聚丙烯酰胺(PAA)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)准互穿网络(quasi-IPN)聚合物溶液被成功用于毛细管电泳紫外检测条件下分离双链DNA片段(对123bp/124bp片段的分离度为0.76)和单链DNA片段(对123b/124b片段的分离度为0.97). 该quasi-IPN筛分介质粘度小(在25oC时的粘度为23.5mPa·s)且温度升高粘度下降. 该筛分介质具有动态涂敷能力可直接用于非涂层毛细管柱。根据实验结果,柱温和电场强度会明显影响DNA片段在该介质中的迁移行为。在变性条件下,最长片段为1353碱基的单链DNA样品可以在40分钟内获得分离,其中309/310b片段的分离度为0.88。    

19.  限制性内切酶指纹-高效毛细管电泳激光诱导荧光法测定原核/真核质粒  被引次数:1
   王荣  贾正平  阮金秀  谢华  陈巧云  贾海  张强  徐娟  敖燕《分析化学》,2007年第35卷第8期
   采用线性聚丙烯酰胺修饰石英毛细管的高效毛细管电泳无胶筛分技术,对原核/真核质粒用不同限制性内切酶酶切,运用限制性内切酶指纹-高效毛细管电泳激光诱导荧光(REF-HPCE-LIF)检测法同时对内切酶酶切后多个和较长DNA片段进行了检测,电泳缓冲液为1×TBE(pH8.3),阴极电压进样(10kV,5s),分离电压13kV,25℃,激光诱导荧光检测器检测(λex=520nm)。结果表明,所建立的REF-HPCE-LIF方法可对原核/真核酶切后多个和较长DNA片段进行检测,获得了满意的限制性内切酶指纹图谱,能够检测片段大小相差不超过10bp。所建立的方法较琼脂糖电泳分辨率高,可应用在检测多个和较长DNA片段的突变,在诊断肿瘤方面有一定应用前景。    

20.  电化学发光-聚合酶链式反应方法检测胰腺癌中K-ras基因点突变  
   朱德斌  邢达  唐亚兵  周小明《分析化学》,2007年第35卷第5期
   发展了一种可用于快速检测胰腺癌中K-ras癌基因点突变的电化学发光-聚合酶链式反应(ECL-PCR)分析方法。该法采用三联吡啶钌标记的上游引物和生物素标记的下游引物对目的片段进行PCR扩增;再采用限制性内切酶MvaI对扩增产物进行酶切。由于野生型样品和突变型样品间存在酶切位点的变化,其中只有野生型样品能被切断;通过生物素与链霉亲和素包被的磁珠连接,将生物素标记的DNA片段收集到检测池中,进行电化学发光检测。采用该法对13例胰腺癌组织中的K-ras癌基因第12位密码子进行点突变分析,只需要10μL样品、20min孵育时间和30s采集时间,就可得出其中有12例存在点突变,点突变率为92.3%。本方法操作简便、安全、快速、灵敏,可用于检测任何一种导致限制性内切酶位点改变的基因点突变。    

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号