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1.
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大肠杆菌异源表达pMMO活性中心pmoB及生物催化研究
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张铁男《分子催化》,2016年第30卷第2期
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颗粒甲烷单加氧酶（pMMO）是甲烷氧化菌中催化甲烷氧化生成甲醇的一种酶．Methylococcus capsulatus IMV 3021的pMMO活性位点是pmoB亚基，该亚基是一种可溶性蛋白．我们研究将pmoB亚基进行异源表达及生物催化活性的验证．当培养基中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）浓度为5 mmol／L时，可以观察到异源表达pmoB亚基具有催化甲烷氧化成甲醇活性，生成甲醇浓度为1．04 mmol／L．研究pMMO活性对于开发能直接将甲烷转化成甲醇的新型、环保催化剂有非常重要意义．
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2.
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苯乙烯生物催化氧化制环氧苯乙烷的研究 被引次数：2
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刘爱民 李树本《分子催化》,1991年第5卷第4期
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1.引言 单加氧酶是氧化还原酶的一类,因其能够活化分子氧并将其中一个氧原子插入到有机化合物中而引起广泛的研究兴趣。甲烷单加氧酶广泛存在于多种烷烃氧化菌、烯烃氧化菌和酵母等微生物中。已经发现、甲烷单加氧酶在细胞中负责将甲烷转变成甲醇(图1)。 此外,甲烷单加氧酶能催化氧化相当多的化合物,其中许多反应都是化学上不易实现的。例如,C_1—C_8烷烃的羟化,C_2—C_4烯烃的环氧化等等。该酶作为催化剂突出的优点还在于它在催化氧化时表现出的高立体选择性,其酶促过程往往可以获得有光学活性的产品。从
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3.
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甲烷氧化细菌催化二氧化碳生物合成甲醇的研究 被引次数：2
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崔俊儒 辛嘉英 牛建中 夏春谷 李树本《分子催化》,2004年第18卷第3期
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甲烷氧化细菌中包含的甲烷单加氧酶(MMO)、甲醇脱氢酶(ADH)、甲醛脱氢酶(FaldDH)、甲酸脱氢酶(FateDH)经过一系列反应能够把甲烷深度氧化生成二氧化碳，并生成一定的能量物质．把二氧化碳还原为甲醇是一个需要能量的过程，目前还没有已知的有机体在温和条件下完成这一反应．研究发现，甲基弯菌Methylosi-nus trichosporium IMV 3011可以催化二氧化碳生物转化生成甲醇．在休眠的悬浮细胞中充人二氧化碳后，反应一段时间在反应液中检测到了甲醇．二氧化碳转化成甲醇是一个需要能量推动的反应，为了补充反应所消耗的能量．反应一段时间后需要用甲烷进行再生，以恢复细胞中的还原当量NADH．我们进行了反应再生的交替连续批式反应，甲醇积累量能够维持在一个比较稳定的水平．理论上，反应不会增加温室效应，这是一个有效的、环境友好的、可恢复的反应过程．
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4.
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环氧丙烷的连续生物合成
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辛嘉英 崔俊儒 陈建波 李树本 夏春谷《催化学报》,2001年第22卷第5期
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利用含有甲烷单加氧酶（MMO）的甲基单胞菌Methylomonassp．GYJ3整细胞催化丙烯环氧化制取环氧丙烷时，辅酶NADH的消耗和产物抑制是反应难以连续进行的主要原因．为解决这些问题，通过批式反应考察了丙烯－甲烷共氧化反应合成环氧丙烷的可能性，发现反应气体中甲烷含量为30％时环氧丙烷的产量较高．在搅拌式生物反应器中，通过最佳配比的混合反应气体的连续循环将产物环氧丙烷抽提出来，从而克服了产物抑制．该生物反应器最初的环氧丙烷日产量为268μmol，连续操作12d后，MMO仍保留96％的初始活性．
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5.
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甲醇驱动的环氧丙烷连续生物合成
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辛嘉英 柳眉 张颍鑫 夏春谷 李树本《催化学报》,2007年第28卷第7期
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采用甲醇蒸气作为碳源对甲基弯菌IMV 3011进行驯化培养,然后逐渐增加液态甲醇的浓度使其适应,得到了能耐受甲醇(φ(MeOH)=1%)的甲基弯菌IMV 3011.对甲基弯菌IMV 3011进行甲烷-甲醇共培养可得到大量具有甲烷单加氧酶(MMO)活性的细胞.研究了添加甲醇对甲基弯菌IMV 3011生长和MMO活性的影响,发现甲醇能够促进甲基弯菌IMV3011的生长.在批式反应器中,添加甲醇能够提高甲基弯菌IMV 3011的催化环氧化能力,说明甲醇可以作为电子供体通过再生辅酶NADH驱动环氧丙烷合成.考察了在膜反应器中用细胞悬浮液连续合成环氧丙烷的可行性.结果表明,通过192 h连续抽提产物环氧丙烷,避免了其对环氧化反应的抑制,流出液中环氧丙烷的浓度仍保持在1.35 mmol/L左右.
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6.
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颗粒性甲烷单加氧酶分离纯化方法的研究进展 被引次数：1
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林惠颖 辛嘉英 李春雨 孙立瑞 夏春谷《分子催化》,2018年第32卷第1期
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颗粒性甲烷单加氧酶(pMMO)是甲烷氧化菌的特征酶之一,在生物催化方面具有广泛的应用前景,但由于其内膜蛋白的性质以及纯化过程中的不稳定性,使其生物化学性质、金属活性位点等方面仍存在许多未知和争议.着重总结了颗粒性甲烷单加氧酶的分离纯化方法,并对其活性以及与甲烷氧化菌素-Cu(methanobactin-Cu)和其他物质之间的作用关系进行了概述,以促进颗粒性甲烷单加氧酶的深入研究和应用.
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7.
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甲基单胞菌GYJ3催化环氧丙烷的半连续合成 被引次数：3
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辛嘉英 崔俊儒 陈建波 李树本 夏春谷《分子催化》,2001年第15卷第3期
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利用含有甲烷单加氢酶（MMO）的甲烷氧化细菌整催化丙烷环氧化制取环氧丙烷，其产物抑制和辅酶NADH消耗是反应难以连续进行的主要原因，采用甲烷再生NADH，研究了丙烯和甲烷共氧化和氧物氧丙烷积累对甲基单胞菌GYJ3的环氧化活性的影响，并考察了在具有产物连续收系统的两段式生物反应器中用细菌胞悬浮液半连续生产环氧丙烷的可行性，将再生和环氧化过程分开进行，以减小甲烷和丙烯的竞争抑制，通过连续抽提产物环氧丙烷，克服了产物抑制，该半连续过程分别在不同的温度下共进行了70h，产生环氧丙烷438μmol。
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8.
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甲烷生物催化氧化制甲醇:固定化细胞催化剂的制备及其催化性能的研究
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尉迟力 夏仕文 李树本《催化学报》,1997年第18卷第6期
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研究了利用无机载体（活性炭、氧化铝、分子筛等）吸附法和天然藻胶（海藻酸钙等）包埋法制备的固定化甲烷氧化细菌的催化性能及其在生物反应器中的反应，结果表明，在进行甲烷制甲醇的反应中、活性炭吸附制备的固定化细胞的操作稳定性最好，但其初始酶活性与休止游离细胞相比损失了６０％￣８０％，海藻酸钙包埋的固定化细胞初始酶活性高（与游离细胞相比，可保持５５％￣９０％的酶活性），但反应中甲醇累积速度很低，而双重介质（
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9.
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甲烷生物催化氧化制甲醇——几种化学物质对Methylosinus trichosporium 3011甲醇累积的影响 被引次数：2
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尉迟力 缪德埙 李树本《合成化学》,1993年第4期
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本文报导了在 Methylosinus trichosporium 3011细胞反应液中加入一些化学物质对甲醇累积的影响。结果表明,Na~+抑制甲烷单加氧酶的活性。当 M.trichosporium 3011细胞反应液中含高浓度磷酸根时,只有很少量甲醇累积下来。EDTA 和 Na_2EDTA 甲醇累积的促进作用小于甲酸钠或甲酸的作用。但由于 EDTA 不仅可以抑制甲醇脱氢酶的活性,而且可以螯合 Na~+,而甲酸则可使 NADH 辅酶再生。因此,反应液中含有2mM EDTA 和20mM 甲酸时甲醇累积量最高。
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10.
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甲烷单加氧酶活性化合物的体外重构 被引次数：3
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华绍烽 范云场 张磊《分子催化》,2016年第30卷第6期
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甲烷氧化菌中甲烷单加氧酶既能催化甲烷转化为甲醇，也能降解小分子含氯有机物。将甲烷单加氧酶组分进行基因重组表达，利用表达的组分重构酶活性化合物，测定了重构化合物的丙烯环氧化活性及对三氯乙烯和三氯甲烷的降解。结果显示：经过30℃、220 r/min、20 min降解，约有52%的三氯乙烯被降解；在32 ℃、220 r/min、8 h反应条件下，约有26%的三氯甲烷被降解；表明甲烷单加氧酶亚基组分表达正确，能够在微生物体外重构活性化合物。
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11.
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甲烷单加氧酶催化机理的研究进展
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罗亚玲 张雷 宗敏华《广州化学》,2006年第31卷第2期
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甲烷单加氧酶是甲烷营养细菌代谢过程中的重要酶系,同时也是一类能够很好地催化底物分子单加氧反应的生物催化剂,在工业应用、医药和环境治理方面有着广泛的应用前景。文章综述了近年来在甲烷单加氧酶催化机理方面的研究,着重阐述了含非血红素双铁核的结构及活化氧分子和底物的机理。
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12.
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外源生长因子对甲烷单加氧酶活性和稳定性的影响 被引次数：2
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尉迟力 沈润南《分子催化》,1997年第11卷第2期
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研究结果表明，外源生长因子（维生素Ｂ１２、ｄ－生物素、５－磷酸－吡哆醛、叶酸、原黄素、核黄素）的加入可以使Ｍｅｔｈｙｌｏｓｉｎｕｓ ｔｒｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ３０１１菌的生长量增加，但添加生物素、吡哆醛和叶抑制甲烷单加氧酶和可溶性甲烷单加氧酶酶活性，而维生素Ｂ１２、核黄素和原黄素则明显促进甲烷单加氧酶和可溶性甲烷单加氧酶酶活性，可使甲烷单加氧酶和可溶性甲烷单加氧酶酶活性分别提高４０％左右和１５－４０
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13.
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甲烷单加氧酶的催化性能 被引次数：3
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沈润南 李树本 尉迟力 马清泉《催化学报》,1997年第18卷第3期
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研究了来源于ｅｔｈｙｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）的催化性能，结果表明，当组成该酶的三个组分，羟基化酶、调节蛋白Ｂ和还的酶的摩尔比为１：１．７：２．０时，重组的ＭＭＯ体系酸疼的比活最高，为３４２ｎｍｏｌ／（ｍｇ．ｍｉｎ），当反应体系的ＰＨ在６．５－７．５时，ＭＭＯ酶的活力最大，研究了纯ＭＭＯ催化甲烷羟基化反应作丙烯环氧化反应的特性，以及金属离子和电子本对ＭＭＯ催化反应的影
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14.
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二氧化碳存在下甲烷氧化细菌催化甲烷生物合成甲醇 被引次数：6
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崔俊儒 辛嘉英 牛建中 夏春谷 李树本《催化学报》,2004年第25卷第6期
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在甲烷单加氧酶和脱氢酶系的作用下,甲烷氧化细菌Methylosinus trichosporium IMV 3011可以把甲烷氧化成二氧化碳. 在反应体系中充入一定比例的二氧化碳后,检测到了甲醇的积累. 混合气中CO2,CH4,O2和N2的体积比为2∶1∶1∶1时甲醇的积累量达到最大. 在超滤膜反应器中进行了连续反应,利用反应混合气产生的压力将生成的甲醇从反应体系中分离. 连续反应198 h后甲醇的积累量没有明显下降.
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15.
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稳定同位素表征有机物甲烷化代谢动力学
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何品晶 吕凡 邵立明 章骅《化学进展》,2009年第21卷第2期
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有机物甲烷化可通过乙酸发酵型、氢营养型和甲基营养型3种途径进行,确定各个途径对甲烷生成的贡献率是其动力学研究的基本问题,稳定同位素示踪技术是研究生态体系甲烷主导生成途径的创新方法.本文综述了稳定同位素技术表征甲烷生成途径的方法进展及影响测试解析结果的因素.产甲烷过程中的稳定同位素分馏效应是影响测试结果解析的关键,甲烷菌类型、生长阶段、底物丰度、温度等是其主要影响因素;对典型产甲烷生态体系进行控制实验,积累分馏效应数据及联合应用微生态分子生物学表征方法,是提高稳定同位素技术对甲烷生成途径区分水平的可行方法.联合应用稳定同位素表征技术和微生态原位表征方法,对高浓度有机酸胁迫条件下的生物质类有机物厌氧发酵甲烷化途径的研究结果表明,面临高浓度有机酸迅速累积的环境,中温发酵条件下,优势菌种为甲烷八叠球菌,依时间次序,通过乙酸发酵和氢营养型途径利用累积的有机酸产生甲烷;而在高温条件下,有机酸则通过乙酸氧化和氢营养型甲烷化途径的串联反应被降解.运用稳定同位素表征技术揭示甲烷生成途径可为针对性的微生态调控提供依据.
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16.
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氧化还原酶介导生物级联催化研究进展
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伍开琳 陈永正《合成化学》,2018年第4期
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氧化还原酶种类丰富,广泛应用于生物催化级联反应中。以细胞色素P450单加氧酶和羰基还原酶为例,综述了两者参与的级联催化反应及其在合成手性胺和手性醇等化合物中的应用,并对发展氧化还原酶级联催化反应面临的辅酶循环、限速步骤和化合物抑制等问题进行了讨论。
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17.
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Baeyer-Villiger单加氧酶在有机合成中的应用 被引次数：2
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姜标 罗军 黄浩 陈颖 李祖义《有机化学》,2005年第25卷第10期
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综述了Baeyer-Villiger单加氧酶在有机合成中的应用.较之传统的化学反应, 氧化酶催化剂反应有较好的选择性、可控性和经济性. 环己酮加氧酶是一种还原型辅酶I (NADPH)依赖型氧化酶, 是最早被报道能够催化Baeyer-Villiger氧化的酶. 这些重要反应产生了合成化学家很感兴趣的扩环产物. 环己酮加氧酶也是有用的生物催化剂, 由于辅酶再生的问题已被工程菌克服了, 所以能像全细胞催化剂那样使用. 对酮包括杂环酮进行Baeyer-Villiger氧化和动态动力学拆分, 放大这种反应作为合成路线是很有前途的.
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18.
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甲烷单加氧酶的催化机理 被引次数：5
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沈润南 尉迟力 李树本 马清泉《催化学报》,1997年第18卷第4期
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研究了来源于Ｍｅｔｈｙｌｏｍｏｎａｓｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）催化机理，结果表明，用还原剂处理基于酶可得么不同还原态的羟基化酶，其中全还原态的羟基化酶具有ＭＭＯ催化活性，还原酶和调节蛋白单独存在的均没有ＭＭＯ活性，确定了羟基化酶组分是ＭＭＯ的催化活性中心，用紫外光谱法证实了ＮＡＤＨ和还原酶之间的相互作用，即还原酶接受ＮＡＤＨ的电子，使氧化态的ＦＡＤ转化为还原态的ＦＡＤ，ＭＭＯ的电子传
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19.
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光动不对称加氢制备高光学纯度(S)-4-三甲基硅基-3-丁炔-2-醇的研究
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胡锐 张承平 裴志胜《化学学报》,2013年第71卷第7期
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高光学纯度的(S)-4-三甲基硅基-3-丁炔-2-醇是一种重要的药物手性中间体.以4-三甲基硅基-3-丁炔-2-酮作为模型底物,从51株不产氧光合细菌中筛选出一株高效目标功能菌株Thiocapsa roseopersicina SJH001作为生物催化剂进行光动不对称加氢催化反应,在未经优化的反应条件下,其产物(S)-TMSBL的ee值高于99%,产率高达80%以上.从Thiocapsa roseopersicina SJH001分离得到了新的NADPH依赖型氧化还原酶[(S)-氧化还原酶和(R)-氧化还原酶].粗酶经硫酸铵分级沉淀、Q-sepharose阴离子交换层析、Sephacryl S-200丙烯葡聚糖凝胶过滤层析后在SDS-PAGE上显示为单一条带,其酶蛋白的相对分子质量为44.5 kDa,相对酶活为449.8 U/mg,高于文献报道的同类具有对映体选择性氧化还原酶.通过比较光照强度、pH值、反应前对菌体细胞热预处理、底物浓度对Thiocapsa roseopersicina SJH001胞内氧化还原酶的活性和构型产生的影响,进一步在分子水平阐明了光动不对称加氢催化反应的机理.
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20.
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甲基弯菌IMV3011细胞生物催化二氧化碳制甲醇 被引次数：3
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辛嘉英 蔡岩松 王艳 张颖鑫 夏春谷《分子催化》,2008年第22卷第4期
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甲基弯菌IMV 3011可以催化二氧化碳生物转化生成甲醇.在细胞悬浮液中充入二氧化碳后,反应一段时间后在反应液中检测到了甲醇产生.但是甲烷氧化细菌细胞合成甲醇的能力受到了细胞内还原当量的限制.研究发现,细胞内贮存的聚-β羟基丁酸(PHB)分解后能够产生还原当量,可以提高甲醇的产生能力.本文通过改变培养基中氮和铜的起始浓度对PHB积累量进行调节来提高甲基弯菌IMV 3011还原二氧化碳生成甲醇的能力.结果表明,随着细胞内PHB含量的增加甲醇的产生能力也会增加.当细胞内PHB的积累量达到38.6%时,将二氧化碳还原成甲醇的能力最强.当PHB的积累量超过38.6%时细胞生成甲醇的能力反而降低.
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