基于磁性微球的固定化金属亲和载体及其在蛋白质/多肽纯化中的应用

采用模板法制备的单分散磁性硅胶微球,经过表面修饰偶联上亚氨基二乙酸(IDA),与过渡金属离子Cu2 螯合,制成一种新型的磁性固定化金属亲和纯化载体。用牛血清白蛋白(BSA)作为模型进行磁性固定化金属亲和吸附蛋白的研究,结果表明,BSA在磁性亲和载体上的吸附可用Langmuir吸附方程描述,对BSA的饱和吸附量为90mg/g。将磁性亲和载体用于带有组氨酸标签的镇痛抗肿瘤多肽(analgesic-antitumorpeptide,AGAP)纯化,在未经过滤的细胞裂解液中可以将AGAP一步纯化,非特异性吸附低,操作简便,完全适用于含有组氨酸标记的重组多肽或蛋白的分离纯化。     

染料壳聚糖微球的制备及其对牛血清白蛋白(BSA)吸附性能的研究

采用反相悬浮交联法制备壳聚糖微球,对微球进行羟丙基氯化及氨基化,并偶联色素配体CibacronBlueF3GA,得到一种新型染料亲和吸附剂.以牛血清白蛋白(BSA)为目标蛋白,考察了该染料亲和吸附剂的吸附性能,发现其对BSA有较高的吸附量(95.2mg/g),吸附行为满足Langmuir吸附等温式.负载牛血清白蛋白的微球容易洗脱,洗脱率高达99%.     

刷状结构的阳离子性接枝微粒QPDMAEMA/SiO_2对牛血清白蛋白的吸附特性

以微米级硅胶微粒为基质,通过接枝聚合和大分子反应,制备了具有刷状结构的阳离子性接枝微粒,深入研究了其对牛血清白蛋白(BSA)的强吸附能力、吸附机理和吸附热力学.首先使含叔胺基团的单体甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯(DMAEMA)在硅胶微粒表面发生接枝聚合,制得接枝微粒PDMAEMA/SiO2,然后以氯乙胺为试剂,使接枝大分子PDMAEMA链中的叔胺基团发生季铵化反应,获得了具有刷状结构的阳离子聚电解质的功能接枝微粒QPDMAEMA/SiO2.测定了微粒QPDMAEMA/SiO2的zeta电位,实施了对BSA的等温吸附实验,考察了介质pH值、离子强度及温度对吸附作用的影响,研究了吸附热力学.研究结果表明,功能接枝微粒QPDMAEMA/SiO2比接枝微粒PDMAEMA/SiO2具有更高的zeta电位,在静电相互作用驱动下,微粒QPDMAEMA/SiO2对BSA具有很强的吸附能力.吸附容量随介质pH值的增大呈现先增大后减小的变化趋势,当pH值等于BSA的等电点(pI=4.7)时,具有最高的吸附容量(高达112 mg?g-1).以等电点为界,离子强度对吸附容量会产生完全相反的影响作用:当介质pH值小于BSA的等电点时,电解质浓度增大,吸附容量增高;当介质pH值等于BSA的等电点时,吸附容量几乎不随电解质的浓度发生变化.吸附过程熵值减小而且放出热量,是一个焓驱动的吸附过程.     

刷状结构的阳离子性接枝微粒QPDMAEMA/SiO2对牛血清白蛋白的吸附特性

以微米级硅胶微粒为基质, 通过接枝聚合和大分子反应, 制备了具有刷状结构的阳离子性接枝微粒, 深入研究了其对牛血清白蛋白(BSA)的强吸附能力、吸附机理和吸附热力学. 首先使含叔胺基团的单体甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯(DMAEMA)在硅胶微粒表面发生接枝聚合, 制得接枝微粒PDMAEMA/SiO₂, 然后以氯乙胺为试剂, 使接枝大分子PDMAEMA链中的叔胺基团发生季铵化反应, 获得了具有刷状结构的阳离子聚电解质的功能接枝微粒QPDMAEMA/SiO₂. 测定了微粒QPDMAEMA/SiO₂的zeta 电位, 实施了对BSA的等温吸附实验, 考察了介质pH值、离子强度及温度对吸附作用的影响, 研究了吸附热力学. 研究结果表明, 功能接枝微粒QPDMAEMA/SiO₂ 比接枝微粒PDMAEMA/SiO₂ 具有更高的zeta 电位, 在静电相互作用驱动下, 微粒QPDMAEMA/SiO₂对BSA具有很强的吸附能力. 吸附容量随介质pH值的增大呈现先增大后减小的变化趋势,当pH值等于BSA的等电点(pI=4.7)时, 具有最高的吸附容量(高达112 mg·g^-1). 以等电点为界, 离子强度对吸附容量会产生完全相反的影响作用: 当介质pH值小于BSA的等电点时, 电解质浓度增大, 吸附容量增高; 当介质pH值等于BSA的等电点时, 吸附容量几乎不随电解质的浓度发生变化. 吸附过程熵值减小而且放出热量,是一个焓驱动的吸附过程.     

活性蓝F3GA固载的无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯亲和色谱填料的制备与应用

以3.0 μm无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂为基质,与三嗪染料活性蓝F3GA(Cibacron Blue F3GA)反应,制备出 一种固定化染料聚合物高效亲和色谱填料。考察了应用该填料时流动相中的盐离子浓度、有机溶剂及流速等对牛血清白蛋白(BSA)和 溶菌酶(Lys)保留行为的影响。实验结果表明,该染料亲和填料具有良好的色谱性能。利用前沿色谱法测定了染料与溶菌酶之间的表观 解离常数为5.26×10-5 mol/L。使用该填料成功地从鸡蛋清和小牛血清中分别分离纯化了Lys和BSA,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶 电泳(SDS-PAGE)分析显示Lys和BSA的纯度分别为95%和92%。     

用于生物探测的PAMAM树形高分子增强免疫磁性微球

采用悬浮聚合的方法制备羧基修饰的聚苯乙烯磁性微球(CMM)，研究了CMM和CMM-PAMAM(第5代)两者与牛血清蛋白(BSA)的结合状况。结果显示；CMM与BSA的结合量为22.2μg／mg。PAMAM偶联在磁性微球表面后，提高了磁性微球表面官能团的密度，因而CMM-PAMAM(第5代)与BSA的结合量可达54．4μg／mg。     

葡聚糖免疫磁性毫微粒的制备及作为复合靶向载体研究

用共沉淀法制备出具有超顺磁性的葡聚糖磁性毫微粒.研究了制备过程中葡聚糖浓度、铁盐用量、搅拌速度、氨水浓度和Fe～(3+)/Fe～(2+)摩尔比对葡聚糖磁性毫微粒有效粒径的影响.抗人乳腺癌单抗与高碘酸钠氧化的葡聚糖磁性毫微粒反应形成葡聚糖免疫磁性毫微粒,并对它的磁化率、形态和抗体保留活性等性质进行了研究.通过放射免疫实验考察葡聚糖免疫磁性毫微粒体外结合肿瘤抗原的能力,同时研究了放射性标记的葡聚糖免疫磁性毫微粒在动物体内的磁性和抗体导向能力.     

链亲和素-磁性微粒的制备及其应用

通过物理吸附和共价作用机制, 制备两种链亲和素-磁性微粒, 即链亲和素-金磁微粒和链亲和素-氨基磁粒, 并对其在不同缓冲液中的稳定性进行研究; 采用酶抑制法测定两种链亲和素-磁性微粒对游离生物素的结合能力; 分别以紫外吸收和固相核酸杂交方法, 测定两种链亲和素-磁性微粒对生物素标记寡核苷酸探针的固定化容量及活性, 并与Dynabeads®M-270 Streptavidin进行比较. 结果表明: 通过物理吸附作用制备的链亲和素-金磁微粒, 适用于核酸杂交与检测常用的STE (Tris-NaCl-EDTA) 缓冲系统, 通过共价作用形成的链亲和素-氨基磁粒, 适用于STE和磷酸盐(PBS)缓冲系统; 1 mg链亲和素-金磁微粒和链亲和素-氨基磁粒对游离生物素的最大结合容量分别为4950和5115 pmol; 对生物素标记寡核苷酸探针(24 mer) 的结合容量分别为2839和2978 pmol, 测定结果均是Dynabeads®M-270 Streptavidin的6~7倍; 与FITC-标记互补寡核苷酸的杂交结果表明, 固定于链亲和素-磁性微粒表面的寡核苷酸探针保持了较好的生物学活性.     

α，ω─二羧基聚乙二醇磁性毫微粒固定化碱性蛋白酶的研究

本文用共沉淀法制备了平均直径为３８４纳米的α，ω─二羧基聚乙二醇磁性毫微粒．碱性蛋白酶通过吸附交联法被固定于磁性毫微粒．研究了制备过程中的吸附时间、给酶量、戊二醛浓度、ｐＨ和离子强度对磁性固定化酶活力及酶固定化率的影响．比较了磁性蛋白酶磁性固定化酶与自由酶的酶学性质，磁性固定化酶的最适温度有改变，但热稳定性显著提高；磁性固定化酶的最适ｐＨ向酸性方向移动了１．０个ＰＨ单位。     

接枝微粒PMAA/SiO2对胆红素吸附性能的研究

采用溶液聚合法将甲基丙烯酸(MAA)接枝于硅胶微粒表面,制得了接枝微粒PMAA/SiO2；并通过静态吸附实验研究了该功能微粒对胆红素的吸附性能,考察了介质pH值、离子强度及温度等因素对吸附性能的影响,研究了在牛血清白蛋白(BSA)存在下该微粒的吸附性能.静态吸附实验结果表明,接枝微粒PMAA/SiO2对胆红素具有较强吸...     

磁性壳聚糖微球对牛血清白蛋白的吸附性能

在微乳液体系中, 以戊二醛为交联剂制备了磁性壳聚糖纳米粒子(Fe₂O₃-CS). 采用透射电子显微镜(TEM)、红外光谱(IR)、振动样品磁强计(VSM)等手段对纳米粒子进行表征. 结果表明, 纳米粒子的粒径在40 nm左右, 分散性良好, 具有较好的磁响应性能. 以碳二亚胺(EDC)为活化剂, 研究了Fe₂O₃-CS纳米粒子对牛血清白蛋白(BSA)分子的吸附性能, 并使用原子力显微镜(AFM)、紫外分光光度计(UV)进行表征. Fe₂O₃-CS粒子对BSA 的吸附大致符合Langmuir吸附模型, 298 K时饱和吸附量约为250 mg·g^-1, 吸附常数为0.007 L·mg^-1. 将BSA-粒子分散在不同pH的缓冲溶液中, 研究BSA-粒子复合物的稳定性. 用聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)对结果进行表征, 发现在碱性条件下BSA分子能从磁性粒子表面脱附下来.     

Molecularly imprinted ionic liquid magnetic microspheres for the rapid isolation of organochlorine pesticides in environmental water

A new type of molecularly imprinted ionic liquid magnetic microspheres was synthesized by aqueous suspension polymerization, using 4,4′‐dichlorobenzhydrol as a dummy template, and 1‐allyl‐3‐ethylimidazolium hexafluorophosphate and methacrylic acid as co‐functional monomers. The results of morphology and magnetic property evaluation of the obtained microspheres demonstrated that it was monodispersed spherical, possessed a rough surface, and an outstanding magnetic properties. Binding experiments revealed that it had a substantial adsorption capacity and strong recognition ability to organochlorine pesticides (OCPs) in aqueous solution. Then the microspheres were applied as an adsorbent of magnetic dispersive solid‐phase extraction for the selective recognition and rapid determination of OCPs in environmental water. Under the optimum conditions, good linearity of the three types of OCPs (dicofol, tetradifon, and p,p′‐dichlorodiphenyldichloroethane) was achieved in the range of 1.0–100 ng/mL (r ≥ 0.9994). The recoveries at three spiking levels ranged from 82.6 to 100.4% with the RSDs less than 6.9%.     

Fabrication of Organic Hec Nanocomposites Modified with Lysine as a Potential Adsorbent for Bilirubin Removal

As one of the typical phyllosilicate clays, hectorite (Hec) has some excellent characteristics and has been greatly applied in adsorption field for the removal of dye, endotoxin, etc. In this study, organic Hec nanocomposites modified with l-Lysine (Lys/Hec NCs) were prepared via solution intercalation method for BR removal. The effects of ionic strength, pH values, initial concentration of BR, and BSA concentration on the adsorption capacity for BR of Lys/Hec NCs were investigated. Results indicated that the adsorption capacity for BR of nanocomposites could reach 40 mg/g when the initial bilirubin concentration was 200 mg/L. However, the adsorption amount of Lys/Hec NCs decreased with increasing the concentration of BSA, but Lys/Hec NCs could still maintain a higher adsorption rate. The adsorption kinetics and adsorption isotherms indicated that the adsorption process of Lys/Hec NCs agreed well with the pseudo-second-order model and the Langmuir isotherm, respectively. Moreover, Lys/Hec NCs also exhibited excellent cytocompatibility. These obtained results demonstrate that Lys/Hec NCs prepared in this study had great potential to be used in hemoperfusion.

     

锂在纤维素基磁性聚偕胺肟载锰树脂上的吸附

研究了Li+在纤维素基磁性聚偕胺肟载锰树脂（MMAO）上的吸附行为。实验结果表明，每一吸附中心与两个Li+离子结合．吸附容置随LiCl浓度和吸附中心密度的增大相应增大．在合适条件下，吸附容量达58gLi／kgMnO2。     

碱性品红修饰磁性纳米粒子的制备及在分枝杆菌分离中的应用

痰或其它各种体液内结核分枝杆菌(MTB)阳性是诊断结核病(TB)的金标准.结核硬脂酸(TBSA)是鉴定分枝杆菌与其它非分枝杆菌的特征组分,可用于TB的诊断[1,2]。     

染料配体固相萃取剂的制备及萃取性能

脲醛树脂-zro2复合微球;染料配体;固相萃取剂     

壳聚糖微球负载的己二胺型聚酰胺-胺树状大分子的制备及对胆红素的吸附

通过反相悬浮反应制备了戊二醛交联的壳聚糖(CS)微球,以CS微球为载体,合成了己二胺型低代数聚酰胺-胺(Polyamidoamine,PAMAM)树枝状大分子(Genaration≤3).考察了该微球在生理条件下对水溶液中胆红素的吸附行为,探讨溶液的pH值、离子强度、温度、胆红素初始浓度和牛血清白蛋白等因素对吸附的影响...     

Expanded Bed Chromatography as a Tool for Nanoparticulate Separation: Kinetic Study and Adsorption of Protein Nanoparticles

Expanded bed adsorption was investigated together with its suitability for the practical recovery of nanoparticulate mimics of products such as plasmid DNA and viruses as putative gene therapy vectors. The study assessed the binding of protein nanoparticles fabricated from bovine serum albumin (BSA) with average size of 80 nm as a model system and viral size/charge mimic to the streamline DEAE adsorbent in the expanded bed column chromatography. The adsorption kinetics and adsorption mechanism for the BSA nanoparticles on the adsorbent were studied. In batch adsorption studies, the factors nanoparticle concentration, contact time and adsorbent amount, affecting adsorption isotherms were investigated. Subsequently the data were regressed against the Lagergren equation, which represents a first-order kinetics equation and also against a pseudo-second-order kinetics equation. The results demonstrated that the adsorption process followed a Langmuir isotherm equation. The kinetics of the adsorption process followed a pseudo-second-order kinetics model with a rate constant value of 0.025 g mg^?1 min^?1. The dynamic binding capacity of the BSA nanoparticles on an expanded bed was calculated. The recovery of the nanoparticles was more than 85%.     

免疫亲和富集-荧光光谱法检测牛血清白蛋白的研究

本文通过戊二醛法合成免疫磁球(IMMs),采用荧光电镜、透射电镜和振动样品磁强计对其进行表征。合成的IMMs为单分散的球形结构,粒径约为510 nm,具有超顺磁性(饱和磁化强度为40.44 emu/g)。基于此,以牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质模型,建立了免疫亲和富集-荧光光谱法用于目标蛋白质的分离与检测。考察并优化了影响免疫亲和富集的因素。在最佳实验条件下,IMMs对目标蛋白质的最大吸附容量为107.7μg/g,可重复使用10次以上。将该方法应用于人血清基质中BSA的测定,加标回收率不低于89.3%,由基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪测得分离后的BSA纯度较高。结果表明,该方法适用于人血清样品中蛋白质的选择性分离与检测。     

磁性壳聚糖微球的制备及对Cr(Ⅵ)的吸附性能研究

用壳聚糖包埋磁流体,用戊二醛交联制成磁性壳聚糖微球,并用红外光谱表征其结构。用制备的磁性壳聚糖微球吸附Cr(Ⅵ)离子,考察了其对Cr(Ⅵ)离子的吸附性能;探讨了吸附时间、溶液pH值、吸附剂用量、温度、Cr(Ⅵ)起始浓度以及其他离子存在对Cr(Ⅵ)离子去除率的影响。实验结果表明,磁性壳聚糖微球吸附Cr(Ⅵ)离子的最佳条件为:吸附平衡时间40 min,最佳吸附pH值6左右,磁性壳聚糖微球用量10 mg,温度升高有利于提高磁性壳聚糖微球的吸附效率,Cr(Ⅵ)离子起始质量浓度为12μg/mL,无机盐的存在引起磁性壳聚糖微球的吸附性能降低。并且考察了吸附剂的再生性能,实验结果表明磁性壳聚糖微球具有良好的重复使用性。