磁珠表面核酸探针的固定及电化学方法检测

报道了用戊二醛将氨基修饰的寡核苷酸探针固定于氨基磁珠表面制成核酸传感器,传感器与生物素标记的DNA杂交,再利用亲和素－生物素偶合系统,偶联上亲和素标记的碱性磷酸酶。碱性磷酸酶催化底物α-萘酚磷酸酯（α－NATP）水解形成具有电化学活性的α-萘酚,用示差脉冲伏安法测定杂交结果,本法测得短链DNA片断的浓度线性范围为10－1000μg/L;最低检测限为3μg/L。作者优化了相关的检测条件,并成功测定了乙型肝炎病毒HBV－DNA的片段。     

两种Taqman探针的制备及荧光检测性能比较

采用固相合成法,分别合成FAM/TAMRA和FAM/BHQ2双荧光标记的Taqman探针,得到的粗产物分别采用乙醇沉淀法、离子对反相色谱法、凝胶过滤柱脱盐法纯化.采用实时荧光PCR法,分别从感染的南瓜果实中检测到黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV),扩增曲线表明采用该实验条件制备的探针检测性能良好.在相同荧光PCR反应体系...     

超顺磁性免疫磁珠体系用于植物油中黄曲霉毒素B1的检测研究

利用化学共沉淀方法,制得了主要成分为Fe3O4的超顺磁性纳米磁珠。纳米磁珠和硅烷偶联剂氨丙基三乙氧基硅烷（APTES）反应而带上氨基基团。带上氨基的磁珠通过戊二醛活化后发生醛基化,与黄曲霉毒素B1（AFB1）多克隆抗体偶联得到黄曲霉毒素B1免疫磁珠。利用该免疫磁珠为净化工具,建立了有机溶剂萃取、免疫磁珠净化、高效液相色谱（HPLC）检测植物油中黄曲霉毒素B1的方法。该方法具有良好线性,线性范围为5~50μg/L,相关系数达0.9994,检出限为0.5μg/L,平均回收率为96%,相对标准偏差为12.5%。该方法操作简单、灵敏度高、准确性好,可用于植物油中黄曲霉毒素B1的检测。     

铁纳米线/壳聚糖/抗体生物探针的制备和层析检测

以戊二醛为交联剂制备Fe纳米线/壳聚糖复合物,研究其对牛血清白蛋白的吸附性能:缓冲液pH为6.0时,达到最大平衡吸附量,为148.40 mg/g;以Fe纳米线/壳聚糖交联吸附α-HCG抗体制备生物探针,组装层析试纸条,进行免疫层析实验,结果表明:其检测灵敏度为10 IU/L,与市场上销售的胶体金早孕试纸条相比,可以将早孕检测时间提前2～3 d.     

自动化磁珠提取纯化仪器快速检测禽流感

不久前,赛默飞世尔科技推出产品King Fisher系列自动化磁珠提取纯化仪器。据悉,此产品是联合Invitrogen公司Ambion病毒RNA提取试剂盒,将传统方法的禽流感检测由21天缩短至4h左右。此技术经过美国国家兽医服务实验室验证,是美国农业部认可的禽流感检测的分子生物学方法。禽流感快速高通量检测新技术是基于分子生物学的方法,在病毒感染的初期即可快速确诊病毒的存在。该方法包括两大主要步骤:(1)联合使用赛默飞世尔公司的King Fish-er自动化磁珠提取纯化仪器,及Invitrogen公司的Ambion病毒RNA提取试剂盒,进行自动化的病毒RNA提取,该步骤需时约30min;(2)实时定量RT-PCR检测病毒RNA,该步骤需时约3h。整体方法经过优化,并经过超过200000禽类咽喉拭子样品的检测验证。这项技术可以用于从生物体液和无细胞样品中(如血清、血浆、口腔拭子和细胞培养液)提取病毒RNA。从无细胞样品中分离纯化RNA比从组织和培养细胞中分离纯化RNA更具挑战性。自动化磁珠提取纯化仪器快速检测禽流感@林     

基于磁珠的可见光检测微阵列信号的新方法

以磁珠作为标记物,提出了一种在微阵列上检测核酸的新方法。该法基于生物素同链霉亲和素的亲和作用,利用磁珠的超顺磁性和宏观可见特性,使得杂交结果可在普通的光学显微镜或放大镜下检测,甚至肉眼可见。以合成探针为对照,用参比荧光标记染料Cy3标记方法,对这种新方法的检出限进行了研究,并在此基础上采用大肠杆菌16s rDNA的PCR产物作为样品,进行了细菌检测的尝试,取得了较好的实验结果。本法所得的实验结果易于观测,无需采用大型的荧光检测仪器,因而大大降低了检测成本,与其它可见光检测方法(如金胶银染等)相比,具有方便、快捷的特点。这种新方法在传染病检测和环境监测中将具有广阔的应用前景。     

用于乙肝表面抗原检测的压电免疫传感器的研制

研制了一种用于乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）检测的新型传感器———石英压电免疫传感器。采用聚乙烯亚胺粘附和戊二醛交联法在金电极上固定抗体蛋白，对固定化过程进行了监测。ＨＢｓＡｇ含量的检测范围为１～４０ｍｇ／Ｌ。使用过的电极用０２ｍｏｌ／Ｌ乙醇胺（ｐＨ＝８）解吸，可重复使用。将此传感器用于实际血清样品的检测，与酶联免疫吸附法所得结果吻合。     

水热法制备质谱专用提取多肽的金属螯合纳米磁珠

应用水热法合成质谱专用提取血清多肽的金属螯合纳米磁珠, 可用于质谱对血清中多肽分布情况的研究, 获得血清多肽谱. 对磁珠进行透射电镜(TEM), 原子力显微镜(AFM)和傅立叶红外光谱FT-IR的表征, 显示该粒子粒径在70～90 nm. 并通过质谱验证该金属螯合磁珠能有效提取血清中的多肽, 该磁珠为质谱进行疾病诊断解决样品制备的技术难题, 具有广阔应用前景.     

β-环糊精修饰CdTe荧光探针制备及用于菊酯类农药代谢产物检测

建立了基于β-环糊精修饰的CdTe量子点(β-CD-CdTe)探针的菊酯类农药代谢产物的荧光检测方法.通过β-CD-CdTe的杯烃结构和菊酯类农药代谢产物间苯氧基苯甲醛(3-PBALD)苯环之间的\"主-客体\"相互作用形成包络物,实现了对3-PBALD的定量测定.在优化条件下,该荧光探针响应值与间苯氧基苯甲醛浓度在0.05～0.5 μg/mL之间呈线性关系,线性方程为?IF=681.2c+192.5,检出限为0.03 μg/mL.将其应用于水样中间苯氧基苯甲醛加标回收实验,回收率在84.7％～91.6％之间,相对标准偏差(RSD)低于4.3％.     

纳米磁性微球免疫伏安法测定乙肝表面抗原

采用化学键合法将乙肝抗体固化在自行制备的纳米磁性高分子功能微球表面 ,利用免疫夹心反应原理 ,捕获溶液中的乙肝表面抗原和标记有辣根过氧化物酶的乙肝第二抗体 .在外加磁场的作用下 ,抗体抗原结合物从样品溶液中分离 ,在含有邻氨基苯酚和过氧化氢的底液中 ,生成具有电活性的化合物 3 氨基吩呃嗪 ,用示差脉冲伏安法进行测定 .响应电流与乙肝表面抗原浓度分别在 0 2～ 1 0和 1 0～ 5 0 0ng·mL-1成线性关系 ,检出限达 0 0 60ng·mL-1.采用本方法检测血清中乙肝表面抗原 ,灵敏度大大高于目前临床采用的酶联免疫吸附法 .     

Site-Specific C(sp3)–H Aminations of Imidates and Amidines Enabled by Covalently Tethered Distonic Radical Anions

The utilization of N-centered radicals to synthesize nitrogen-containing compounds has attracted considerable attention recently, due to their powerful reactivities and the concomitant construction of C−N bonds. However, the generation and control of N-centered radicals remain particularly challenging. We report a tethering strategy using SOMO-HOMO-converted distonic radical anions for the site-specific aminations of imidates and amidines with aid of the non-covalent interaction. This reaction features a remarkably broad substrate scope and also enables the late-stage functionalization of bioactive molecules. Furthermore, the reaction mechanism is thoroughly investigated through kinetic studies, Raman spectroscopy, electron paramagnetic resonance spectroscopy, and density functional theory calculations, revealing that the aminations likely involve direct homolytic cleavage of N−H bonds and subsequently controllable 1,5 or 1,6 hydrogen atom transfer.     

Palladium-catalyzed intramolecular aerobic C-H amination of enamines for the synthesis of 2-trifluoromethylindoles

A new palladium-catalyzed C-H amination of aryl enamines for the synthesis of trifluoromethylated indoles is established. The attractive features of this transformation are the use of atom-economical O₂ as the oxidant and easily prepared enamines as substrates. A variety of pharmaceutically important 2-trifluoromethyl indoles can be targeted in moderate to good yields with good functional compatibility.     

Rhodium(II)-Catalyzed Selective C(sp3)−H Amination of Alkanes

The development of an efficient catalytic system enabling the conversion of alkanes to valuable nitrogen-containing building blocks is reported. Light alkanes can be selectively functionalized by an intermolecular C(sp³)−H amination reaction that proceeds at room temperature in the presence of only 1 mol % of a dirhodium(II) complex. Selective amination of tertiary C(sp³)−H within acyclic or cyclic alkanes used as limiting components leads to the corresponding amides isolated with yields in the 51–96 % range. The reaction, that can be performed on a gram-scale, applies with equal levels of efficiency and selectivity to more complex hydrocarbons.     

可见光促进三级胺α位C(sp^3)-H键的胺化反应研究

报道了可见光催化氧化还原循环促进三级胺α位C(sp^3)-H键的胺化反应.该反应使用简单、易得的N-苯甲酰氧基邻苯二甲酰亚胺为氨基自由基前体,利用廉价、可再生的可见光作为绿色能源,首次实现了一系列N,N-二甲基苯胺衍生物的α位C(sp^3)-H键的直接胺化.该方法涉及双自由基交叉偶联机理,具有条件温和、收率与官能团兼容性良好以及底物适用范围广的特点,为三级胺类化合物的官能团修饰提供了一种简单、安全、便利的新途径.     

血清肌钙蛋白Ⅰ液相色谱串联质谱法建立及优化

建立并优化了液相色谱串联质谱法定量血清肌钙蛋白I.免疫磁珠富集血清肌钙蛋白I,经变性、还原、乙酰化、胰酶消化、固相萃取纯化,采用SymmetryShieldC18柱分离,以含0.1%甲酸水溶液和含0.1%的甲酸乙腈溶液为流动相,梯度分离目标肽段,流速0.2 mL/min,温度35℃;使用电喷雾正离子模式扫描,在多反应监测模式下进行测定,目标肽段出峰时间约为4.95 min;方法的最低检测限为2.5 ng/mL,定量限为8.32 ng/mL,在（10~600）ng/mL范围内线性良好,相关系数为0.99;标准物质SRM2921偏倚为-7.94%~-6.49%;低、中、高样本总不精密度分别为6.43%、3.18%和2.75%;携带污染率为-0.47%~0.04%.本方法选择性高、重复性和准确度好、携带污染小,为进一步研究血清cTnI参考方法建立提供依据.     

One-Pot Synthesis of Primary and Secondary Aliphatic Amines via Mild and Selective sp3 C−H Imination

The direct replacement of sp³ C−H bonds with simple amine units (−NH₂) remains synthetically challenging, although primary aliphatic amines are ubiquitous in medicinal chemistry and natural product synthesis. We report a mild and selective protocol for preparing primary and secondary aliphatic amines in a single pot, based on intermolecular sp³ C−H imination. The first C−H imination of diverse alkanes, this method shows useful site-selectivity within substrates bearing multiple sp³ C−H bonds. Furthermore, this reaction tolerates polar functional groups relevant for complex molecule synthesis, highlighted in the synthesis of amine pharmaceuticals and amination of natural products. We characterize a unique C−H imination mechanism based on radical rebound to an iminyl radical, supported by kinetic isotope effects, stereoablation, resubmission, and computational modeling. This work constitutes a selective method for complex amine synthesis and a new mechanistic platform for C−H amination.     

免疫磁珠富集净化-超高效液相色谱法同时测定陈皮中4种黄曲霉毒素

将ProtElut NHS(N-羟基丁二酰亚胺)偶联磁珠与抗黄曲霉毒素总量单克隆抗体偶联得到黄曲霉毒素总量免疫磁珠,其具有较好的分散性,良好的磁性能和特异的选择性。本文建立了陈皮中4种黄曲霉毒素的免疫磁珠富集净化,超高效液相色谱(UPLC)检测方法。样品经甲醇-PBS缓冲溶液(2:8, v/v)提取后用免疫磁珠富集净化,1 mL甲醇洗脱;经ACQUITY UPLC HSS T3 C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.8 μm)分离,以水和甲醇为流动相梯度洗脱,采用汞/氙灯荧光检测器测定。实验结果表明,4种黄曲霉毒素在各自的线性范围内峰面积与其质量浓度线性关系良好,相关系数(r²)大于0.999;检出限(信噪比为3)为0.013~0.038 μg/kg,定量限(信噪比为10)为0.044~1.2 μg/kg;平均回收率为63.9%~115.0%,相对标准偏差为0.4%~14.2%,均符合痕量分析的要求。该方法简单快速、准确可靠,可用于陈皮中4种黄曲霉毒素的测定。