一种具高活性的酪氨酸酶基因启动子片段的分离

利用大肠杆菌启动子探测质粒ｐＫＫ２３２－８为载体,经ＨｉｎｄⅢ－ＢａｍＨⅠ完全消化后与ＨｉｎｄⅢ－ＢａｍＨⅠ部分消化的嗜麦芽假单胞菌染色休ＤＮＡ进行体外连接,转化Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１感受态细胞,在含氨苄青霉素（Ａｐ）和氯霉素（Ｃｍ）的选择平板上筛选转化子．从随机挑选的５４株转化子中,获得一株抗氯霉素水平达１０００ｍｇ／Ｌ的转化子Ｅ．ｃｏｌｉＰＡＳＩ,所含重组质粒被命名为ｐＡＳＩ．经限制性酶切分析和杂交分析表明,ｐＡＳＩ质粒上插入了一段来源于嗜麦芽假单胞菌染色体的ＤＮＡ片段,其大小为１．４ｋｂ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明转化子Ｅ．ｃｏｌｉＰＡＳＩ在含Ｃｍ的培养基上,额外表达了一条２２×１０３的ＣＡＴ蛋白质带．将重组质粒ｐＷＳＹ上的嗜麦芽假单胞菌ｍｅｌ基因亚克隆到ｐＡＳＩ上１．４ｋｂ启动子功能片段下游,构建成Ｅ．ｃｏｌｉＡＷＳ工程菌株,使黑色素产率提高了７０．６％．     

嗜麦芽假单胞菌质粒pSH1的限制图谱及km~r标记的克隆

对嗜麦芽假单胞菌Ｐ２菌株（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｍａｌｔｏｏｈｉｌｉａＰ２）的质粒ｐＳＨ１进行了限制酶切分析，确定了ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲⅠ、ＰｓｔⅠ、ＸｂａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、及ＰｖｕⅡ共７种限制性内切酶在ｐＳＨ１、质粒上的切割位点，前４种酶均为单一切点；后３种依次为２、７、５个切点．通过双酶切和部分酶切的方法绘制了ｐＳＨ１质粒的限制酶切图谱．将ｐＧＰ１－２质粒上的卡那霉素抗性基因（ｋｍｒ）片段插入ｐＳＨ１，获得了重组质粒ｐＳＨ２．ｐＳＨ２是由ｐＧＰ１－２质粒上大小为２．９０ｋｂ的ＤＮＡ片段（含ｋｍｒ）和ｇｈＨ１经ＢａｍＨⅠ－ＰｓｔⅠ双酶切产生５．７０ｋｂ大片段组成，它能够重新转化到喀麦芽假单胞菌受体（ｋｍｒ）中，其ｋｍｒ标记能够得到稳定的表达．     

根癌农杆菌的高效电激转化

利用电激法将双元载体质粒ＰＢＩ１２１导入根癌农杆菌ＡＧＬ－１并获得较高转化效率．探讨了不同电激条件对转化效率的影响，并检测了ＣａＭＶ３５Ｓ启动子启动ＧＵＳ基因在根癌农杆菌中的表达．结果表明：根癌农杆菌电激转化的最适电激条件为１１ｋＶ／ｃｍ，２１．５μＦ，电场强度是影响转化效率的关键因素．当质粒ＤＮＡ浓度从０．２ｍｇ／Ｌ增加至０．６ｍｇ／Ｌ时，转化效率呈线性增加．细菌密度对转化效率也有一定影响．最高转化效率为每μｇ质粒ＤＮＡ１．７×１０５转化子．组织化学反应证实ＣａＭＶ３５Ｓ能启动ＧＵＳ基因在根癌农杆菌中表达．     

在大肠杆菌中利用反义RNA抑制乙肝病毒（HBV）X基因的表达

将乙肝病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ株完整的Ｘ基因正向重组到原核表达质粒ｐＢＶ－２２１的ＰＬ启动子下游，得到能表达Ｘ蛋白的重组质粒ｐＢＶ－ＨＢＶ（＋）；同时将Ｘ基因反向重组到原核表达质粒ｐＢＶ－２２０的ＰＬ启动子下游，得到能转录Ｘ基因反义ＲＮＡ的重组质粒ｐＢＶ－ＨＢＸ（－）．利用这两个质粒，构建出能同时转录Ｘ基因ｍＲＮＡ和反义ＲＮＡ的重组质粒ＰＥＸ．ＡＮ－ＨＢＸ，并在原核水平上，证实了反义ＲＮＡ对Ｘ基因的表达具有明显的抑制作用，从而为在真核水平上利用反义ＲＮＡ对Ｘ基因进行调控的研究提供了有利的基础．     

癌胚抗原启动子驱动tk基因在人肺腺癌细胞中的靶向表达

用荧光素酶报导基因,发现ｃｅａ启动子在ＣＥＡ阳性的肺腺癌细胞Ａ５４９中的活性是在ＣＥＡ阴性的宫颈癌细胞Ｈｅｌａ中的１６倍．构建了重组表达质粒ｐＣＥＡｔｋ,ｃｅａ启动子控制效应基因单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶｔｋ）的表达．转染了质粒ｐＣＥＡｔｋ的Ａ５４９细胞对甘昔洛韦（ＧＣＶ）的敏感性是未转染细胞的８６５倍,而转染了ｐＣＥＡｔｋ的Ｈｅｌａ细胞则仍保持对ＧＣＶ的抗性．结果表明：ｃｅａ启动子可用于ＣＥＡ阳性的肺腺癌等细胞的靶向性基因治疗     

人丙型肝炎病毒核心抗原基因的表达和纯化

人丙型肝炎病毒Ｉ型（ＨＣＶ－Ｉ）核心抗原编码区ｃＤＮＡ，全长５７３ｂｐ，编码１９１个氨基酸，被克隆到一种新的表达质粒ｐＲＳＥＴＨｉｓＢ中，转化大肠菌ＢＬ２１菌株，在１ｍｍｏｌＬ－１ＩＰＴＧ诱导３７℃培养５ｈ，核心抗原表达水平达到高峰，表达出分子量２６×１０３的融合蛋白，并在细胞内形成微小晶体．表达水平达到细胞总蛋白的４０％左右，通过纯化，获得的核心抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检查为均一分子量２６×１０３的蛋白，用酶联免疫法进行血清学初步检查，纯化的核心抗原与ＨＣＶ阳性血清显示出强烈的阳性反应，对慢性丙肝病人血清中抗ＨＣＶ抗体的阳性检出率达９３％，而与正常人血清则无阳性反应     

温控表达载体的构建及HIV-1p24的表达与纯化

通过改造原核表达载体ｐ Ｂ Ｖ２２０ 和ｐ Ｅ Ｔ２８,构建出了一种新的通用型温控原核表达载体ｐ Ｖ Ｖ５,该载体携带 Ｐｒ Ｐｌ串联温控启动子以及 Ｈｉｓ Ｔａｇ 的纯化标签,利于目的蛋白的表达与纯化将 Ｈ Ｉ Ｖ１ ｇａｇ 基因的１１４８１８５７ 编码序列分别插入到ｐ Ｖ Ｖ５ｂ、ｐ Ｅ Ｔ２８ｂ 的相应位点,构建了重组表达质粒 ｐ Ｅ Ｇ１ｂ、ｐ Ｂ Ｇ７ｂ,二者在不同受体菌中,表达重组蛋白的量分别占全菌体蛋白总量的 ４２％ 和２８％ 表达产物为融合蛋白并主要以包涵体的形式存在 该蛋白 Ｎ 端与含６ 个组氨酸在内的３０ 个氨基酸残基的多肽相连,利用 Ｉ Ｍ Ａ Ｃ金属螯和层析柱,对包涵体中的重组ｐ２４ 蛋白进行纯化, 其纯度超过 ８０％ ;对上清中的可溶性ｐ２４ 蛋白进行纯化,产物最终纯度超过６７％ 纯化后的重组蛋白可与 Ｈ Ｉ Ｖ１ 型标准阳性血清发生较强的免疫学反应     

紫云英根瘤菌5个互补结瘤菌株所分离到的重组质粒外源片段的酶切图谱

对来源于紫云英根瘤菌７６５３Ｒ总ＤＮＡ基因文库的５个互补结瘤菌株所分离到的重组质粒ｐＮＲ１０２，ｐＮＲ１０３，ｐＮＲ１０８，ｐＮＲ２０３和ｐＮＲ２１３，ＥｃｏＲⅠ酶切表明它们分别携带有一个４．６８，５．０１，５．０４，５．１０或９．３８ｋｂ的外源ＤＮＡ片段．选用１１种内切酶进行单、双酶切分析，建立了重组质粒外源片段的酶切图谱，５个质粒都具有１．７ｋｂ的ＥｃｏＲⅠ－ＢｇｌⅡ片段和１．９ｋｂ的ＥｃｏＲⅠ－ＳａｃⅠ片段．     

小菜蛾颗粒体病毒DNA限制性酶切分析及基因组DNA片段克隆

小菜蛾颗粒体病毒ＤＮＡ用ＢａｍＨＩ和ＸｈｏＩ酶切，经０．７５％琼脂糖凝胶电泳，分别得到１２条带和８条带，平均分子量为１１３．０ｋｂ．用Ｓｕｐｅｒｃｏｓ１Ｃｏｓｍｉｄ作载体，将Ｓａｕ３ＡＩ部分消化的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ随机片段插入该载体的ＢａｍＨＩ酶切位点，转化于ＸＬ１－Ｂｌｕｅ受体菌，经Ａｍｐ平板筛选转化子，挑出２５６个Ａｍｐ＋菌落，以３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ为探针，斑点杂交筛选得到５９个阳性重组体，再经电泳检测，得到了５９个不同大小的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ片段克隆．     

杆状病毒p35基因延缓昆虫细胞凋亡

构建了以新霉素抗性基因为筛选标记的带有ｐ３５基因的转移载体ｐ３５ＩＥ１Ｎｅｏ，以此载体转染Ｓｆ９细胞，经Ｇ４１８筛选得到染色体上稳定整合质粒ｐ３５ＩＥ１Ｎｅｏ的Ｓｆ９细胞，克隆化培养后取名为Ｓｆ９－３５．经细胞原位杂交实验证明，Ｓｆ９－３５细胞的染色体ＤＮＡ上含有ｐ３５基因；经放线菌素Ｄ处理后的细胞核酸电泳检测，证实Ｓｆ９－３５具有抗凋亡特性能够支持凋亡抑制基因缺失的ｖＡｃΔｐ３５病毒复制；发现ｐ３５基因在细胞内组成型表达只能延缓ｖＡｃΔｐ３５感染及放线菌素Ｄ处理诱发的细胞凋亡的过程，而不能完全阻止其诱发的细胞凋亡．     

产碱性聚半乳糖醛酸酶嗜碱细菌抗利福平高产菌株的选育

分离得到产碱性果胶酶嗜碱芽孢杆菌ＮＴＴ３３，其聚半乳糖醛酸酶的产生强烈地受葡萄糖的代谢阻遏，对利福平敏感．通过抗利福平自然突变法，从出发菌株ＮＴＴ３３中筛选抗利福平突变株．采用透明圈法初步筛选出在含葡萄糖和不含葡萄糖果胶培养基上同时产生透明圈的菌株，进一步测定其产酶进程曲线，最后筛选出两株（ＮＴＴ３３－ｃｓ５２，ＮＴＴ３３－ｃｓ３０１）产聚半乳糖醛酸酶活力高的菌株，其酶活力比出发菌株提高５０％～２８０％，并且在葡萄糖存在时，酶活力更高．可以认为这两株菌消除了葡萄糖的代谢阻遏作用     

黑卵蜂寄主识别利它素的性质研究

通过盐析、柱层析和分子筛层析，从松毛虫雌蛾附腺中分离到一种ＳＰ－Ｉ组份，经生化方法检测鉴定，此组份是一种糖蛋白，分子量为１．３５×１０５，等电点为４．２，蛋白质含量９２％，糖含量８％．它能引诱松毛虫黑卵蜂和松茸毒蛾黑卵蜂在非天然寄主上的产卵检查、刺探行为，是一种黑卵蜂寄主识别利它素．     

车前子中多糖含量的测定

采用蒽酮-硫酸法比色测定，用精制车前子多糖测得车前子多糖对葡萄糖的换算因子，对我国同属不同品种的车前子不同采集时间及炮制前后其多糖含量进行了比较研究。结果表明：此测定方法简便可行。供试液在8h内显色稳定，重现性较好，平均回收率为97．8％，RSD=1．41％(n=5)。江西吉安产大粒车前子生品多糖含量在9．15％～9．83％之间，炮制后其多糖含量在6．29％～6.81％之间；南昌新祺周车前GAP标准基地的大粒车前子生品多糖含量为7.85％～8．38％，炮制后其多糖含量为6．01％～6．64％；东北产的小粒车前子生品多糖含量为6．61％，炮制后其多糖含量为6．45％。     

铈对果蝇、家蚕寿命及蚕茧重量的影响

研究了不同浓度氯化亚铈对果蝇寿命,家蚕寿命及其茧重的影响,实验分两部分;（１）用不同浓度的氯化亚铈加入培养基中饲养黑腹果蝇,结果显示１３３ｍｇ／Ｌ浓度时雌果蝇,２６６ｍｇ／Ｌ浓度时雄果蝇的寿命显著延长（Ｐ〈０．０５）;（２）用不同浓度的氯化亚铈溶液浸泡桑叶,风干后分别喂养四眠期的家蚕,浓度分别为１６,３２ｍｇ／Ｌ时家蚕重量显著增加（Ｐ〈０．０５）,在４,８,１６ｍｇ／Ｌ２时家蚕寿命显著延长（Ｐ〈０     

猕猴桃酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶分析及遗传多样性研究

采用不连续聚丙烯酰凝胶垂直平板电泳技术,分析了猕猴桃10个品种的酯酶同工酶和过氧化酶同工酶。结果表明,猕猴桃种内遗传多样性水平较高,多态位点比率P＞75％,等位基因平衡数A为1．67－2。计算了遗传一致度,并据此进行聚类分析,探索了各种间的亲缘关系。     

对宁波大学本科生身体形态和机能的评价

采用９４年度宁波大学全体本科生１８６０名（男１２７０名，女５９０名）有关身高、体重、胸围和肺活量的测量数据与９１年全国样本相比较，用ｔ检验比较９１届本科生１９９４与１９９１年所测上述四项体测数据之间的差异，测定结果分析表明宁波大学学生肺活量与机能指数低于全国样本，差异非常显著。９１届学生９４年比９１年胸围、肺活量有明显增加，但９４年肺活量的均值仍较全国样本低。提出学生今后应加强长跑、游泳等项目的锻炼，以增加肺活量，进一步增强自身的体质。     

山药及盾叶薯蓣对家蚕寿命和小鼠LPO、LF的影响

研究了山药稀醇提取物及盾叶薯蓣皂甙对家蚕寿命及老龄小鼠血浆过氧化脂质(LPO)、肝脏脂褐素(LF)的影响。结果表明：(1)山药稀醇提取物能明显提高家蚕的平均寿命；(2)山药稀醇提取物和盾叶薯蓣皂甙能明显降低老龄小鼠血浆LPO和肝脏LF的含量。揭示山药及盾叶薯蓣有一定的抗衰老作用。     

过程建模和控制中的神经网络与模糊逻辑融合技术的现状与发展趋势

讨论了神经网络与模糊逻辑融合技术的三类系统,即神经模糊系统、模糊神经网络和模糊－神经混合系统及其在系统建模与控制中的应用状况和趋势．     

Brezis－Kato定理的一个推广

利用ＤｅＧｉｏｒｇｅ估计获得了临界指数方程的有界性结果，改进了Ｈ．Ｂｒｅｚｉｓ和Ｔ．Ｋａｔｏ相应的工作。     

一个管理系统的设计分析与开发

本文较详细地讨论了结构系统分析,结构系统设计与实施的方法、工具。并以《西药库管理系统》为例,分析了该系统的逻辑模型、物理模型设计步骤及系统实施的手段.