一个HBsAg基因在大肠杆菌中的强表达系统

利用筛选启动基因的载体系统,从大肠杆菌染色体DNA中获得一个启动基因片段。在它的控制下HBsAg基因在大肠杆菌中有较强的表达。通过抗-HBs亲和层析柱分离纯化了表达产物。用琼脂糖双扩散免疫分析法和聚丙烯酰胺——SDS凝胶电泳对分离纯化的表达产物进行了鉴定。     

天然植物体中与稀土元素结合的DNA

利用分子活化分析方法 ,初步研究了稀土矿区植物铁芒萁叶中稀土元素(REE)与核酸的结合状态 .铁芒萁叶经过提取和生化分离纯化后 ,得到了与稀土元素结合的DNA(REE DNA) .用紫外光谱法鉴定DNA的纯度 ;用考马斯亮兰G 2 5 0光度法测定DNA中的蛋白质 ;并用琼脂糖凝胶电泳分离和检测DNA .同时 ,用仪器中子活化法 (INAA)测定了REE DNA中 8个稀土元素 (La ,Ce ,Nd ,Sm ,Eu ,Tb ,Yb ,Lu)的含量 .研究结果表明 ,用本生化分离流程及琼脂糖凝胶电泳可从铁芒萁叶中提取出纯度比较高的REE DNA ,并证明了稀土元素与DNA的结合是紧密的 .由琼脂糖凝胶电泳图谱可在分子量 2 2kb处得到一条清晰的REE DNA谱带     

小鼠腹水癌细胞中一种DNA聚合酶-模板复合体的纯化和特性鉴定

本文通过两次不连续密度梯度离心和琼脂糖凝胶过滤,对小鼠腹水癌细胞中的DNA聚合酶一内源模板复合体进行了纯化,纯化后酶活性提高了500倍,经鉴定其分子大小为510,000道尔顿。电子显微镜下观察呈均匀球状,直径100—110埃。复合体经DEAE纤维素柱层析分离为两种酶蛋白组份和一种DNA模板。其中最主要的酶蛋白分子量为300,000道尔顿,沉降系数为9.5s;内源DNA模板经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析呈单一区带,沉降系数为3.8s。     

人红细胞20S蛋白酶体的蛋白质组学表征及不同来源20S蛋白酶体异质性的研究

通过整合差速离心和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE)技术,建立了能有效分离20S蛋白酶体(20S core particle,CP)的方法.与传统纯化方法比较,此方法具有经济、快速的特点,并且能够对不同组织细胞来源的CP进行分离.利用本方法对人红细胞来源的CP亚基进行了2-DE分离和MALDI-TOF/TOF MS鉴定.结果显示,可鉴定出33个具有不同相对分子量和等电点的蛋白点,此数量远远多于CP亚基的14种.此外,利用非变性/变性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(native/SDS-PAGE)技术,比较了来源于酵母、小鼠肝脏、人红细胞、人胰腺癌细胞系SW1990和PANC-1的CP及其亚基在电泳行为方面的差异,进行了蛋白酶体异质性初探.     

电泳技术在纳米颗粒分离中的应用

合成纳米颗粒常在尺寸和形状方面具有广泛分布.在很多实验中,需要利用一定大小及形状的纳米颗粒的独特物理化学性质,因此,简便快速的纳米颗粒分离技术越来越受到诸多科学领域的重视.电泳技术以其高分辨率,被广泛用于多种生物大分子如核酸、蛋白质等的分离纯化.纳米颗粒在尺寸上与生物体中的蛋白复合物、细胞器和微生物等十分接近,考虑到带电纳米颗粒与生物分子在电场中的运动行为的相似性,运用电泳技术进行纳米颗粒的鉴定、分离和纯化是一种新的思路,并取得了良好的实验结果.本文主要介绍了琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳以及其他一些电泳技术在纳米颗粒分离中的研究进展.     

一种从人体胚胎中分离纯化的限制性核酸内切酶HsaI

从人、Homo sapiens、胚胎组织及细胞核的抽提物中分离纯化了一种核酸内切酶HsaI。它具有Ⅱ类核酸内切酶的功能、从该酶对λDNA的切割位点来看,它是EcoRI的同功酶,但在洗脱特性上不同于EcoRI。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析可得两条考马氏兰染色带,分子量分别为65000和22000 Daltons。     

CMC-g-DNA接枝共聚物的合成与表征

在磷酸盐缓冲溶液中用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基纤维素钠(CMC)侧链上的羧基; 在室温下再将活化的CMC与5'端经氨基修饰的单链脱氧核糖核酸(DNA)齐聚物(ODNs)反应, 获得CMC上接枝ODNs的共聚物(CMC-g-ODNs), 以Lambda DNA为模板, 通过聚合酶链式反应(PCR), 将接枝的ODNs扩增为长度为1300个碱基对的双链DNA, 从而制得CMC侧链上接枝DNA的共聚物CMC-g-DNA. 采用傅里叶红外光谱仪测定CMC与NHS形成的中间体; 用水平式琼脂糖凝胶电泳和垂直板变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对CMC-g-DNA接枝共聚物进行表征. 结果表明, 合成了CMC-g-DNA接枝共聚物, 且在酸性条件下CMC的活化效果更好; 同时, 接枝在CMC上的DNA在琼脂糖凝胶电泳中迁移速率加快, 而在聚丙烯酰胺凝胶电泳中迁移速率减慢.     

基于生物芯片的核酸凝胶电泳仪

为克服传统平板凝胶电泳法操作步骤繁琐,实验时间长,以及采用紫外光源可能对人体造成伤害等缺陷,该文研制了一种基于电泳芯片的快速凝胶电泳仪,仅需DNA点样于电泳芯片后,将电泳芯片置于该电泳仪便可实现DNA样品快速分离及实时在线成像检测。以20、50、100 bp DNA ladder为检测对象,在仪器内对其分离效果进行验证及优化,其最佳电泳条件为电压100 V/cm,琼脂糖质量分数分别为2. 5%、1. 0%、1. 4%。结果表明在14 min内可以实现3种DNA样品的高效分离,DNA迁移距离与分子量的相关系数均高于0. 9,且该仪器具有较高的稳定性。     

糖蛋白微观不均一组分的毛细管电泳分离

为分离糖蛋白的微观不均一组分 ,建立了以醇胺为电泳缓冲液主要成分、以聚丙烯酰胺涂层毛细管为分离通道的电泳方法 .利用本法可使琼脂糖电泳纯的鸡卵白蛋白分裂出 2 5个以上的峰 ,使转铁蛋白分裂出 1 0个左右的峰 .控制分离能力的关键因素包括缓冲液的组成、浓度、pH和毛细管内壁的性质等 ,其选择与样品有关 .     

不同动物毛的两向凝胶电泳鉴定及其角蛋白组成分析

本文报道一种用于鉴定不同种属动物毛的方法。以二硫苏糖醇为还原剂在尿素存在下,抽提出毛纤维中可溶性角蛋白,经羧甲基化修饰后,通过两向聚丙烯酰胺凝胶电泳,结合对电泳区带和特征斑点的扫描,可对动物毛角蛋白组成作定性和半定量分析。     

限制性内切酶指纹-高效毛细管电泳激光诱导荧光法测定原核/真核质粒

采用线性聚丙烯酰胺修饰石英毛细管的高效毛细管电泳无胶筛分技术,对原核/真核质粒用不同限制性内切酶酶切,运用限制性内切酶指纹-高效毛细管电泳激光诱导荧光(REF-HPCE-LIF)检测法同时对内切酶酶切后多个和较长DNA片段进行了检测,电泳缓冲液为1×TBE(pH8.3),阴极电压进样(10kV,5s),分离电压13kV,25℃,激光诱导荧光检测器检测(λex=520nm)。结果表明,所建立的REF-HPCE-LIF方法可对原核/真核酶切后多个和较长DNA片段进行检测,获得了满意的限制性内切酶指纹图谱,能够检测片段大小相差不超过10bp。所建立的方法较琼脂糖电泳分辨率高,可应用在检测多个和较长DNA片段的突变,在诊断肿瘤方面有一定应用前景。     

家蚕核多角体病毒基因库

本文报道家蚕核多角体病毒基因组DNA经限制性内切酶SalI酶解,琼脂糖凝胶电泳分离,得0.70至 10.0kb大小不同的29种片段.所得 DNA片段与 SalI酶解之质粒pBR 322 DNA进行体外重组后,经转化大肠杆菌 HB 101菌株,获得带重组质粒克隆株.根据重组质粒DNA 中SalI酶插八片段的分子量、Southern法DNA杂交及多种限制性内切酶酶切点等方法鉴定,证明已将家蚕核多角体病毒DNA的24种不同大小的片段克隆在质粒 pBR 322 中.克隆的 DNA片段总长度占病毒基因组DNA的百分之八十。     

琼脂糖凝胶电泳法分离金属性和半导体性单壁碳纳米管

琼脂糖凝胶电泳(AGE)是实现金属性单壁碳纳米管(m-SWCNTs)和半导体性单壁碳纳米管(s-SWCNTs)低成本、规模化分离的有效技术之一。本研究利用琼脂糖凝胶电泳分离单壁碳纳米管。通过紫外-可见-近红外吸收光谱和拉曼光谱对色谱带进行分段表征,发现电泳中迁移的最快的部分m-SWCNTs含量最高。考察了琼脂糖的浓度对SWCNTs中m-SWCNTs分离的影响。结果表明:高的琼脂糖浓度有利于m-SWC-NTs的富集,可以通过扩大电荷密度带来的迁移速率的差异来使SWCNTs中的m-SWCNTs得到更有效的分离。     

分离DNA的琼脂糖凝胶电泳技术

介绍在现代生物学中十分重要的琼脂糖凝胶电泳技术的化学原理,涉及胶体电泳、琼脂糖凝胶的多级结构、DNA分子结构和粒子的电荷作用等化学和生物学基础知识,旨在为高中教育提供一级学科层面的知识联系,供一线高中化学教师和生物学教师用于教学实践。     

毛细管电泳在核酸适配体研究及核酸适配体筛选中的应用

核酸适配体是指通过指数富集配体系统进化(SELEX)技术从随机寡核苷酸文库中筛选得到的高亲和性与特异性的寡核苷酸序列配体。毛细管电泳是高效、快速、低成本的微量分离分析技术。应用毛细管电泳高效、快速筛选核酸适配体是近几年出现的新方法。本文介绍了核酸适配体筛选过程中的主要分离方法如亲和色谱、醋酸纤维素膜、凝胶电泳和磁性分离等方法,并对近年来毛细管电泳在核酸适配体中的亲和作用研究以及用于核酸适配体筛选(CE-SELEX)的主要方法(ECEEM,NECEEM,Non-SELEX和三者比较)和研究进展进行了综述。     

毛细管等电聚焦一毛细管区带电泳二维蛋白质分离平台的构建及其性能

通常采用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)分析组织或细胞的全蛋白质，但难与质谱(MS)直接联用．用高效液相色谱(HPLC)和毛细管电泳(CE)分离分析蛋白质和多肽的一维分离模式的分辨率和峰容量有限．多维柱联用技术比一维分离有更高的分辨率和峰容量，便于和MS直接联用，     

聚丙烯酰胺凝胶电泳直接化学发光成像法分离和检测血液红细胞中的HbA0,HbA1,HbA2和HbF

建立了聚丙烯酰胺凝胶电泳直接化学发光成像分离和检测蛋白质的新方法．应用本方法分离和检测了新生儿脐带血和正常成年人血液红细胞中的不同血红蛋白HbA0,HbA1,HbA2和HbF,并与传统的考马斯亮兰染色法进行了比较,结果表明,本方法灵敏度高、背景低,步骤简单、快速,可以在10min内得到检测结果．此外,我们还以血红蛋白作为探针,检测了人血清蛋白,研究了人血清白蛋白对血红蛋白电泳结果的影响,并优化了发光成像的各种条件．     

缬氨酸Schiff碱金属铜配合物对质粒DNA的切割作用

缬氨酸Schiff碱金属铜配合物(PBP-L-Val-Cu)是新合成的一类非酶类切割工具, 合成了4种类型样品分别为L-CH3 Cu, D-CH3 Cu, L-Ph Cu和D-Ph Cu. 以质粒DNA(pUC18)为材料,分别对这4种类型化合物进行核酸切割效率的研究, 得出适合的反应体系后, 通过琼脂糖凝胶电泳对反应不同时间后核酸切割产物进行检测, 最终分别得到每种化合物将超螺旋型DNA切割成为开环型DNA和直线型DNA的切割效率, 经比较得出L-CH3 Cu型的切割效率是最快的. 将直线型DNA切割产物用琼脂糖凝胶回收试剂盒进行回收, 得到的直线型切割产物可以在T4连接酶的作用下重新连接起来. 利用酶切法对切口进行检测, 结果表明, 切割作用是具有特异性的. 另外, 该化合物对质粒pNQ216也具有切割活性.     

微流控芯片电泳的研究进展

该文综述了微流控芯片电泳的制备、结构和应用,比较了不同材料微流控芯片电泳的制备机理、表面改性和性能特点,归纳和总结了不同结构微流控芯片电泳的进样、分离和检测系统以及不同类型微流控芯片电泳在荧光物质、金属离子、糖、药物、核酸、DNA、氨基酸、多肽和蛋白质分析中的应用,并对微流控芯片电泳的未来发展方向做了展望.     

脱氧核糖核酸的毛细管无胶筛分电泳迁移规律研究

本文研究了不同因素对脱氧核糖核酸(DNA)毛细管电泳迁移行为的影响.采用毛细管无胶筛分电泳法,对不同片段长度DNA进行分离检测,考察DNA片度长度、电场强度、聚合物浓度及分子量等因素对DNA迁移行为的影响.实验结果显示,DNA迁移时间随其长度的增加而延长;电场强度越高,DNA迁移时间越短,分离效果变差;DNA在高浓度聚...