固定化米曲霉催化拆分丙氨酸消旋体的反应特性

研究了溶液ｐＨ、搅拌强度，催化剂用量、底物浓度及产物浓度对固定化米曲霉催化拆分Ｎ－乙酰－ＤＬ－丙氨酸反应的影响。结果表明，低底物浓度（Ｓ〈０．２ｍｏｌ／Ｌ）时反应符合Ｍ－Ｍ方程，底物浓度Ｓ〉０．２ｍｏｌ／Ｌ时，有底物抑制现象，当产物浓度Ｐ〉１０ｍｍｏｌ／Ｌ时反应存在产物抑制现象。     

大孔载体对米曲霉氨基酰化酶的固定化研究

用合成的大孔丙烯酸甲酯-—二乙烯苯交联共聚物(聚丙烯酸甲酯)、丙烯酰胺-N,N′-亚甲基双丙烯酰胺交联共聚物(聚丙烯酰胺)及它们的功能基化产物作为固定化氨基酰化酶的载体。考察了载体性质对固定化氨基酰化酶效果的影响。比较了底物浓度、pH、磷酸缓冲液浓度、温度对氨基酰化酶溶液酶及固定化酶的影响。利用其中一种载体制成固定化酶柱,对DL-蛋氨酸进行了连续拆分,考察固定化酶的操作稳定性。     

高分子载体对米曲霉氨基酰化酶的固定化研究

合成了一系列不同结构的丙烯酸甲酯—二乙烯基苯交联共聚物,并用多乙烯多胺胺解制得了功能基化交联共聚物。研究了交联度、致孔剂用量和不同的功能基化试剂对这些载体固定化氨基酰化酶效果的影响。比较了固定化氨基酰化酶与溶液酶的酶学性质。用这种载体制成固定化酶柱,对N—乙酰—DL—蛋氨酸和N—乙酰—DL—苯丙氨酸进行连续拆分,得到了很好的效果。     

氨基酰化酶的固定化和苯丙氨酸消旋体的拆分

本文合成了一种功能高分子材料,利用其适宜的物理性质和匹配的功能基来固定氨基酰化酶,并进行苯丙氨酸消旋体的拆分,研究结果表明:这种载体对氮基酰化酶蛋白固定容量大,固定化酶比活力高,活力损失小,本文系统地研究了氮基酰化酶拆分苯丙氨酸消旋体的理化性质,包括温度、pH、离子浓度、热稳定性、激活离子、底物浓度以及蛋白变性剂等,并进行苯丙氨酸消旋体的连续拆分,对拆分产物采用离子交换法进行分离精制,真空浓缩得到L-苯丙氨酸的盐酸盐,产率高,对产品进行旋光检验,纯度高。     

α—胰凝乳蛋白酶的固定化及其对DL—苯丙氨酸的光学拆分

以氨丙基多孔球为载体，戊二醛为交联剂制得固定化α－胰凝乳蛋白酶。其含酶量为３．６ｍｇ／ｇ，米氏常数Ｋｍ＝１．２×１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ，最适宜温度为３５℃，ｐＨ值为７．０，对热、酸碱、甲醇以及尿素的稳定性有较大提高，Ｃａ＾２＋激活效应明显。用该固定化酶连续拆分ＤＬ－苯丙氨酸制备Ｌ－苯丙氨酸时，拆分产率高于９０％，产品纯度超过９６％；连续使用２个月后仍能保持较高酶活力。     

脂肪酶的固定化及其在有机酶促反应中稳定性研究

利用吸附法,将圆柱状假丝酵母脂肪酶固定于４种疏水性不同的载体上,固定化酶的活性及稳定性随载休疏水性的增大而增大。用ＹＧＷ－Ｃ６Ｈ５作为载体,在有机溶剂－水双液相体系中催化萘普生甲酯的不对称水解,反应１２０ｈ转化率为２４．７２％,产品的对映体过量值为９４．８２％。     

米曲霉菌体吸附没食子酸的机制研究

用米曲霉CGMCC5992活菌体作为生物吸附剂,吸附含没食子酸的废水。研究了菌体量、初始pH值、时间、起始浓度对吸附效果的影响。通过吸附动力学、热力学模型拟合,并结合扫描电镜(SEM)分析,初步探讨其吸附机理。结果表明,在菌体量8g/L,初始pH=3,起始浓度100mg/L,吸附6h条件下,去除率达到93.40%。米曲霉对没食子酸的吸附符合Langmuir模型,其最大吸附量可达20.24mg/g。吸附动力学可用准二级动力学方程描述。SEM显示,吸附后,米曲霉菌丝球形态以及菌体表面结构发生了改变。     

固定化谷氨酸脱羧酶性能的研究

本文首镒用羧甲基化的以Ｎ,Ｎ’－甲叉双丙烯酰胺交联的烯丙基葡聚糖凝胶生化树脂为新型载体,将谷氨酸脱羧酶固定在ＣＭ－ＣＡＤＢ树脂上。研究了固定化ＧＤＣ的活性与低物浓度,ｐＨ,温度的依存性;动态响应特性;热稳定性和寿命;求算了米氏常数和反应活化能;将固定化ＧＤＣ酶柱与进样系统－离子活度分析器－计算机数据采集系统匹配,构成酶传感器谷氨酸检测装置,测定了固定化ＧＤＣ酶柱的能斯特线性响应曲线,线性方程为ｙ／     

CS-MCM-48复合载体固定化脂肪酶催化苯乙酮一锅法还原转酯化拆分反应

将天然聚合物壳聚糖(CS)涂覆在介孔分子筛MCM-48表面制得CS-MCM-48复合载体,控制CS与介孔分子筛MCM-48质量比为1∶10时,CS-MCM-48的比表面积、平均孔径和孔容分别为408m2/g、2.14nm和0.38cm3/g。在磷酸盐缓冲溶液-异辛烷混合溶剂中制备了固定化假单胞菌脂肪酶(Pseudomonas Cepacia Lipase,PSL)PSL/CS-MCM-48,并用于潜手性苯乙酮一锅法还原转酯化手性拆分反应。结果表明,PSL/CS-MCM-48的催化活性和对映选择性均明显优于纯介孔分子筛MCM-48和壳聚糖制备的固定化酶PSL/MCM-48和PSL/CS。甲苯作溶剂,反应温度为40℃时,底物1-苯乙醇转化率达15.3%,产物(R)-乙酸苯乙酯和(S)-1-苯乙醇的对映体过量值分别为99%和18.0%,对映选择性参数E值达237,固定化酶PSL/CS-MCM-48显示出良好的手性拆分性能。     

CS-MCM-48复合载体固定化脂肪酶催化苯乙酮-锅法还原转酯化拆分反应

将天然聚合物壳聚糖(CS)涂覆在介孔分子筛MCM-48表面制得CS-MCM-48复合载体,控制CS与介孔分子筛MCM-48质量比为1∶10时,CS-MCM-48的比表面积、平均孔径和孔容分别为408 m2/g、2.14 nm和0.38 cm3/g.在磷酸盐缓冲溶液-异辛烷混合溶剂中制备了固定化假单胞菌脂肪酶(Pseudomonas CepaciaLipase,PSL)PSL/CS-MCM-48,并用于潜手性苯乙酮一锅法还原转酯化手性拆分反应.结果表明,PSL/CS-MCM-48的催化活性和对映选择性均明显优于纯介孔分子筛MCM-48和壳聚糖制备的固定化酶PSL/MCM-48和PSL/CS.甲苯作溶剂,反应温度为40℃时,底物1-苯乙醇转化率达15.3%,产物(R)-乙酸苯乙酯和(S)-1-苯乙醇的对映体过量值分别为99%和18.0%,对映选择性参数E值达237,固定化酶PSL/CS-MCM-48显示出良好的手性拆分性能.     

用嗜热菌蛋白酶催化合成天冬甜精并同时进行DL-苯丙氨酸甲酯的光学拆分

以DL-苯丙氨酸甲酯作原料,利用嗜热菌蛋白酶和固定化嗜热菌蛋白酶催化合成了天冬甜精,经拆分得到D-苯丙氨酸甲酯。实验结果表明,不仅天冬甜精产率高,而且D-苯丙氨酸甲酯的回收率好,光学纯度高。     

L—氨基酸氧化酶电极的制作及电极特性的研究

报道了一种新的Ｌ－氨基酸氧化酶电极，这种酶电极系由氨气敏电极和以氨基化玻璃布为载体的酶膜所组成；研究了固定化条件对酶膜活性的影响以及底物浓度、温度和ｐＨ对电极响应特性的影响。该电极在６．０×１０＾－５～４．０×１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ的底物浓度范围内呈良好的线性关系，检测下限为５．０×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ。在最宜条件下，酶电极具有良好的稳定性。     

固定化根霉细胞催化拆分(R,S)-环氧丙醇丁酸酯的研究

用聚乙烯醇包埋、硫酸钠固定法对根霉（ Ｒｈｉｚｏｐｕｓｓｐ．Ｂｃ０－０９）菌体细胞进行了固定化,所得凝胶具有良好的机械性和稳定性． 对固定化细胞催化（ Ｒ,Ｓ）－环氧丙醇丁酸酯水解反应的性能进行了研究． 对ｐＨ值的影响考察结果表明, ３０ ℃下, 反应初速度在ｐＨ 值为５．５ 时最大; 酶的立体选择性在ｐＨ值为５．５～６．０ 时最高, 对映体比率（ Ｅ值）为５７． 对温度的影响考察结果表明,ｐＨ 值为５．５, 反应初速度在５５ ℃时最大; 酶的立体选择性随温度升高而下降． 固定化细胞具有较好的操作稳定性．     

有机相酶催化酯交换反应拆分环戊烯酮的研究

手性现象是生命科学中的普遍现象,手性技术也就成为药物制备和农药生产的发展方向[1].拟除虫菊酯是我国正在发展的新一代高效、低毒农药,其中丙烯菊酯已投放市场[2].市售的丙烯菊酯为外消旋体产品,其(S)型旋光异构体药效比(R)型高出2～5倍.使用其(S)型旋光异构体代替外消旋体时,不但成倍地提高了药效,而且减轻了生物体内的积累与毒副作用,避免了不必要的环境污染.     

单一粒度法研究固定化酶内扩散限制的酶应动力学

本文提出了用一种粒度的固定化酶,利用在高底物浓度与低底物浓度时分别表现为零级反应与一级反应的特点,研究在连续式反应器中内扩散限制下酶反应动力学的方法。通过在棒条状异构化酶上葡萄糖转化为果糖的反应,测求了酶反应的本征参数以及一级反应速度常数、表观米氏常数、底物扩散系数、效率因子等动力学参数。     

聚苯胺纳米纤维固定化辣根过氧化物酶的合成及性能研究

FeCl3为氧化剂合成了聚苯胺纳米纤维,纤维直径20~30 nm,并以此为载体对辣根过氧化物酶进行了固定化.SEM,FTIR,UV-Vis等结构表征证明辣根过氧化物酶HRP中的质子可作为掺杂剂与聚苯胺主链中的氮结合,酸根离子作为对阴离子依附于聚苯胺主链周围,实现了聚苯胺载体对生物酶的固定化.聚苯胺纳米纤维具有较大的比表面积,有利于增加酶的负载量,提高固定化酶活性.该方法简单,快速,载体材料无需活化.与游离酶相比,固定化酶对pH,高温的耐受性,不同温度下的热稳定性均有了明显的提高,在4℃条件下保存7周后固定化酶活性几乎没有损失,重复使用6次后仍可保持80%的酶活,说明纳米结构的聚苯胺是一种良好的载体,可实现生物酶的高效固定化.     

溶胶-凝胶法固定化酶的问题与解决途径

综述了溶胶-凝胶固定化酶由于凝胶化时间过长，凝胶孔径偏小以及凝胶机械强度低等问题的存在引起酶构象改变、屏蔽，底物与产物的扩散速率慢以及酶与底物的不易接触。并提出了相应的解决办法：选择适宜的前驱体及固定化条件可以缩短凝胶化时间；加入聚乙二醇改性剂、非表面活性剂模板剂可以调大凝胶的孔径；微波快速干燥。加入添加剂则可以提高凝胶的机械强度。同时也提出可以避免酶变性的其他一些途径，如对凝胶老化阶段的特殊处理，选择合适的缓冲液等。     

高效液相色谱手性固定相的研究Ⅴ——二肽叔丁酰胺型手性固定相拆分α-氨基酸、二茂铁基氨基酸及二肽衍生物对映异构体

 ]本文应用高效液相色谱(L，L)-二肽叔丁酰胺型键合硅胶手性固定相拆分N-乙酰基--氨基酸甲酰、N-乙酰基--二茂铁基丙氨酸乙酯及N-叔丁氧羰驶基亮氨酰亮氨酸甲酯等对映异构体、结果表明：部分固定相对氨基酸衍生物对映异构体有拆分效果；大部分固定相对二茂铁基丙氨酸衍生物对映异构体有较好拆分效果；所有固定相对由（D，D）-及（L，L）-亮氨酰亮氨酸衍生物构成的外消旋体均有良好的拆分效果，分离系数最高达1.79。本文对部分化合物对映异构体的拆分机制进行了初步探讨。