蜂王浆中磷酸腺苷的提取及超高效液相色谱分析

比较了高氯酸提取、热水提取和热硫酸镁溶液提取3种提取方式对蜂王浆中磷酸腺苷三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和单磷酸腺苷(AMP)的提取效果,发现在低温(低于4 ℃)下以5%高氯酸的提取效果最佳。采用超高效液相色谱-紫外检测法分析蜂王浆中的ATP, ADP和AMP的含量。以BEH Shield RP18柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)为分析柱,以50 mmol/L的磷酸二氢铵(pH 6.5)和乙腈为流动相进行梯度洗脱,3种磷酸腺苷在4 min内实现了较好的分离。以加标王浆样品作添加回收率测定,ATP, ADP和AMP的回收率分别为84.1%～94.3%,86.2%～93.7%和91.0%～104.3%,相对标准偏差均小于10%。方法已被用于一些实际样品的分析,以了解ATP, ADP和AMP在蜂王浆样品中的分布情况。     

用反相高效液相色谱法测定小鼠心肌、骨骼肌中AT P、AD P和AM P的含量

采用反相高效液相色谱法同时测定小鼠心肌、骨骼肌组织中ATP(三磷酸腺苷 )、ADP(二磷酸腺苷 )、AMP(一磷酸腺苷 )的含量。以150mmol/L磷酸二氢钾缓冲液 (pH=6.25)为流动相 ,采用BDShypersilC18 不锈钢色谱柱 ,紫外检测波长为254nm ,线性范围为1～200mg/L。ATP、ADP和AMP的平均加标回收率均在90 %以上 ,检出限分别为10ng、10ng、15ng。该法灵敏、准确 ,试剂费用低。     

高效液相色谱法测定细胞内三磷酸腺苷及其代谢物的含量（英文）

研究了三磷酸腺苷(ATP)及其代谢物在细胞内的含量以及2-叔丁基-1,4-苯醌(TBBQ)对ATP及其代谢产物在细胞内含量的影响。建立了一种高效液相色谱法(HPLC)用于快速分离、检测细胞内ATP及其代谢产物(二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP))的含量。使用岛津高效液相系统及艾杰尔Venusil MP C18柱,采用等度洗脱的方式。流动相A相为50 mmol/L磷酸氢二钠和15 mmol/L三甲胺(TEA),用醋酸(HAc)调节pH至7.88;流动相B相为甲醇。采用建立的高效液相色谱法得到了3种代谢物的工作曲线,相关系数高(R~2≥0.999 6),MRC-5细胞中3种代谢物的含量均在线性范围(0.1~100μmol/L)内。该方法检出限低。采用预冷的80%(体积分数)甲醇水溶液提取细胞内的代谢物。该研究建立的方法成功地应用于检测MRC-5细胞中的ATP、ADP和AMP的含量,结果表明,TBBQ会对ATP、ADP、AMP在细胞内的含量产生影响,但TBBQ浓度和ATP、ADP以及AMP在MRC-5细胞内浓度的关系比较复杂。     

铜绿微囊藻中磷酸腺苷的提取及分析

比较了酸提取、有机溶剂提取、MgSO4水溶液加热提取以及MgSO4水溶液加热超声波提取4种方式对磷酸腺苷(ATP、ADP和AMP)的提取效果,确定以MgSO4水溶液加热超声波提取效果最佳。采用MgSO4加热超声波提取时,2 mL提取液对ATP、ADP和AMP的提取效果较好。将ATP、ADP和AMP的混合标准溶液放于沸水浴中保温时,随着保温时间的延长,对ATP和AMP的影响较大,而对ADP的影响相对较小。实验结果证明,以MgSO4水溶液为提取液,用100℃加热10 min后,在超声波细胞粉碎机中超声破碎10 min的提取效率最高,既简单又无毒。用反相高效液相色谱等强度洗脱分离与紫外检测分析藻细胞中的ATP、ADP和AMP的含量,在较短的时间内(10 min)实现了较好的分离,分析准确而快速,是一较好的定性和定量分析方法。ATP、ADP和AMP的回收率分别为88%~97%、103%~107%和109%~115%,均在80%~120%之间,并且标准偏差和相对标准偏差均小于10%,证实了可以用加热超声波破碎提取,HPLC分析ATP、ADP和AMP的方法来提取和分析藻细胞中的ATP、ADP和AMP。     

高效液相色谱法测定棉籽中的ATP，ADP，AMP

测定生物组织中腺苷三磷酸(ATP)、腺苷二磷酸(ADP)和腺苷一磷酸(AMP)的含量,在研究生物的一些生理生化现象中有重要意义。利用不同方法定量分析这三种腺苷酸的报道已有很多。本文所述是用反相高效液相色谱法,对棉籽中的ATP、ADP和AMP进行测定。     

反相高效液相色谱法同时测定人膀胱癌T24细胞中三磷酸腺苷及其代谢物的含量北大核心CSCD

所有生物过程都伴随着能量代谢,细胞内的能量供应主要依赖于线粒体合成的三磷酸腺苷(ATP)[1-2]。因此,建立有效的细胞内ATP及其代谢产物[二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)]的定量方法是非常有必要的。ATP、ADP和AMP的结构和理化性质非常相似,同时测定会有一定困难。     

三磷酸腺苷、二磷酸腺苷和一磷酸腺苷的毛细管电泳分析研究

研究了三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)的毛细管电泳行为，考察了运行缓冲液的pH值、磷酸盐浓度、分离电压、分离温度等因素对这三种化合物的迁移时间和分离效果的影响。结果发现，这些因素对上述三种化合物的分离有显著的影响，在优化的分离条件下，三种物质在10min内可得到分离。方法的检出限为0．125mg／mL，线性范围为0．125～2．00mg／mL。相关系数为0．991～0．997。     

超声辅助提取-反相高效液相色谱法测定虾中三磷酸腺苷及其关联产物的含量北大核心CSCD

提出了超声辅助提取-反相高效液相色谱法测定虾中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、腺苷酸(AMP)、肌苷酸(IMP)、肌苷(HxR)和次黄嘌呤(Hx)含量的方法,并研究了贮藏条件对K值的影响。称取2.0 g粉碎后的虾肉,加入10%(体积分数)高氯酸溶液20 mL,在冰水浴中均质1 min,超声提取5 min,于4℃离心2 min。用5%(体积分数)高氯酸溶液20 mL重复上述操作,合并两次上清液,用水定容至50 mL。分取5 mL,用5.0 mol·L^(-1)和2.5 mol·L^(-1)氢氧化钠溶液调节溶液酸度至pH 6.0~6.4后,再用0.048 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(pH 5.7)定容至10 mL。以Ultimate■XB-C_(4)反相色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为固定相,以不同体积比的0.048 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(pH 5.7)-甲醇混合溶液为流动相进行梯度洗脱,外标法定量。结果显示:ATP、ADP、IMP标准曲线的线性范围为1.250×10^(-1)~1.000×10^(2)mg·L^(-1),AMP、HxR、Hx标准曲线的线性范围为6.250×10^(-2)~5.000×10 mg·L^(-1),检出限为0.65~2.2 mg·kg^(-1);混合标准溶液和供试品溶液中6种目标物测定值的相对标准偏差(n=6)为0.28%~8.7%;对实际样品进行加标回收试验,回收率为75.3%~114%。方法用于测定不同贮藏温度和贮藏时间下虾样品中ATP、ADP、AMP、IMP、HxR、Hx的含量,结果表明随着贮藏时间的延长,K值逐渐增大;并且贮藏时间一定时,贮藏温度越低,K值增大速率越慢,说明低温有利于虾的保鲜。     

定量分析小鼠肝和肌肉组织磷酸腺苷含量及其影响因素

在定量分析动物组织ATP、ADP和AMP方法中，HPLC法已成为一种快速、灵敏、准确、廉价的检测手段。然而，有关其影响因素方面的研究报道较少，且主要集中在色谱柱、流动相和流速等方面。本实验着重探讨动物组织样品的保存条件和前处理过程对检测结果的影响，以便在动物组织样品ATP、ADP和AMP含量的检测中更合理地使用HPLC法，准确反映各成分的真实含量。     

反相离子对高效液相色谱法测定心肌组织中的三磷酸腺苷

 采用反相离子对高效液相色谱法测定心肌组织中三磷酸腺苷 (ATP)的含量。样品经高氯酸溶液沉淀蛋白 ,上清液用KOH溶液中和后用反相离子对高效液相色谱法分离测定。色谱柱为SpherisorbODS2柱 ,流动相为甲醇 KH2 PO4缓冲液 (内含 5mmol/LIPR A离子对试剂 ) ,在 2 59nm波长处检测。方法最低检测限为 2mg/L,在 5mg/L～ 1 0 0 mg/L范围内有良好的线性关系 (r=0 9998) ,方法的回收率为 97 8%～ 1 0 4 % ,日内精密度 <4 85% ,日间精密度 <8 81 %。方法准确、灵敏、快速 ,适用于动物和人心肌组织中ATP含量的测定。     

反相高效液相色谱法测定磷酸果糖激酶的活性

采用反相高效液相法(RP-HPLC)测定磷酸果糖激酶的活性.将磷酸果糖激酶与含有果糖-6-磷酸和ATP的反应体系混合,置于30℃水浴中,反应20 min后,沸水浴3 min终止反应.通过RP-HPLC测定酶反应前后产物二磷酸腺苷(ADP)量的变化来分析酶的活性.ADP的生成量在5～400 mg/L范围内具有良好的线性关系,方法的精密度良好(RSD<5%).本方法与通常所用的酶偶联法(ECM)相比准确度高,且简便易行.     

毛细管电泳检测大鼠大脑皮质中三磷酸腺苷二钠含量的动态变化

本文建立了大鼠大脑皮质中三磷酸腺苷二钠(ATP)检测的毛细管电泳方法。以89 mmol/L Tris,89 mmol/L硼酸,2 mmol/L EDTA组成的缓冲液(1×TBE,pH8.0)为分离电解质,在聚丙烯酰胺涂层毛细管上,ATP能与样品中的其它组分高效分离。ATP的浓度在0.5~10μg/mL范围内其峰面积和浓度有良好的线性关系。方法的检出限为0.04μg/mL。ATP迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.8%和5.7%(n=5)。探讨了脑缺血再灌流后ATP含量的变化规律,结果表明短暂脑缺血再灌流后存在着继发性能量衰竭的现象。     

超高效液相色谱-质谱法测定细胞中嘌呤核苷酸的方法探究

建立了检测细胞中嘌呤核苷酸(ATP、ADP、AMP、NAD+和NADP+)的超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)分析方法。采用KinetexTMHILIC柱(50 mm×4.6 mm,2.1μm)进行分离,对细胞样品的萃取方法、流动相组成及质谱参数进行优化。方法学确证表明:各待测物在1.0~100μmol/L范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.99,平均回收率为95.7%~101.1%,相对标准偏差为1.2%~6.1%。本方法的灵敏度高、简便快速、重复性好,可用于细胞中能量代谢的研究。     

哺乳动物细胞是所得多肽复合酶CAD催化反应产物的 HPLC分析

本研究报道了以150mm×4.6mmI.D.Zorbaxoqcyuosyg.10mmoI·L^-1KH~2PO~4和500mmoI·L^-1LKH~2PO~4水溶液为洗脱液,梯度程序为0～5min(φ=1,体积分数)10mmoI·L^-1KH~2PO~4溶液,5～50min由(φ=1)10mmoI·L^-1KH~2PO~4溶液转换到(φ=1)500mmol·L^-1KH~2PO~4溶液时,高效液相色谱分离了哺乳动物细胞中所得肽复合酶ACD催化反应混合物三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和二氢乳清酸(DHO),确定了ATP,ADP和DHO的出峰顺序,制作了工作曲线,确定了催化反应混合物中ATP,ADP和DHO的相应浓度。     

亲水相互作用色谱高效分析人尿液中的ATP

建立了亲水相互作用色谱法高效分析人体尿液中三磷酸腺苷(ATP)的方法。ATP是高能磷酸盐化合物,一种不可替代的生物分子。在本文中,分别使用反相色谱柱和亲水相互作用色谱柱测定ATP。结果表明:在亲水相互作用(HILIC)色谱分离模式下,流动相为甲醇-0.1%的甲酸水溶液=10∶90(v/v)、柱温30℃、流速0.4 mL·min~(-1)、检测波长258 nm时,对ATP的分离效果最佳。在此条件下,测定人尿液中的ATP含量,并在部分样品中的检出1.04～1.65 mg·L~(-1)。进一步加标试验的回收率在77.09%～112.83%之间,相对标准偏差低于13.50%。     

微波-超声波辅助合成聚乙烯亚胺包覆Mn掺杂ZnS量子点用于室温磷光检测三磷酸鸟苷

利用微波-超声波辅助方法合成了水溶性聚乙烯亚胺包覆Mn掺杂ZnS量子点,并建立了基于该量子点的室温磷光检测三磷酸鸟苷(GTP)的新方法。该量子点对GTP具有较高的灵敏度和选择性,能区分GTP与其结构类似物三磷酸腺苷(ATP)、三磷酸胞苷(CTP)、三磷酸尿苷(UTP)、二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)。该量子点的室温磷光对GTP的响应在3 min内达到平衡,其磷光增强值与GTP浓度呈良好的线性关系,对GTP的检出限为0.6μmol/L。该方法成功应用于癌细胞提取液中GTP的检测,为GTP的检测提供了新方法。     

肌球蛋白中金属离子与ATP相互作用及其催化ATP水解的研究进展

生物体内细胞在氧化物质的过程中释放出的大量自由能,这些能量先形成高能磷酸化合物三磷酸腺苷（adenosine 5′-triphosphate,ATP）,当ATP水解为ADP（二磷酸腺苷,adenosine 5′-diphosphate）和无机磷酸时.     

肌球蛋白中金属离子与ATP相互作用及其催化ATP水解的研究进展

生物体内细胞在氧化物质的过程中释放出的大量自由能,这些能量先形成高能磷酸化合物三磷酸腺苷（adenosine 5′-triphosphate,ATP）,当ATP水解为ADP（二磷酸腺苷,adenosine 5′-diphosphate）和无机磷酸时.     

三磷酸腺苷大量生产方法研究成功

三磷酸腺苷(ATP)是许多酶催化反应所需要的供应能量的辅助因子(Cofactor)。最近,美国麻省理工学院G.M.Whitesides博士领导的研究组宣布他们研究成功了一种能大量生产ATP的方法,即将丙酮热解生成乙烯酮,再与磷酸进行加成而得乙酰磷酸,后者在腺苷激酶、腺苷酸激酶和乙酸激酶等三种酶共同作用下将腺苷进行磷酸化而成一磷酸腺苷(AMP)、二磷酸     

哺乳动物细胞是所得多肽复合酶CAD催化反应产物的 HPLC分析

本研究报道了以150mm×4.6mmI.D.Zorbaxoqcyuosyg.10mmoI·L^-1KH~2PO~4和500mmoI·L^-1LKH~2PO~4水溶液为洗脱液,梯度程序为0～5min(φ=1,体积分数)10mmoI·L^-1KH~2PO~4溶液,5～50min由(φ=1)10mmoI·L^-1KH~2PO~4溶液转换到(φ=1)500mmol·L^-1KH~2PO~4溶液时,高效液相色谱分离了哺乳动物细胞中所得肽复合酶ACD催化反应混合物三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和二氢乳清酸(DHO),确定了ATP,ADP和DHO的出峰顺序,制作了工作曲线,确定了催化反应混合物中ATP,ADP和DHO的相应浓度。