中华鳖(Trionyx sinensis)稚鳖“白点病”的病原菌及其防治的研究

从患“白点病”的病鳖体中分离到四株菌,经人工感染试验,仅一株菌对健康稚鳖表现出较强的致病力。对该菌的形态特征、培养特性和生理、生化反应的鉴定认为：该病原菌是嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）应用药敏纸片法研究了２０种化学疗剂对该病原菌的生长抑制作用,结果表明：环丙沙星、氟哌酸、庆大霉素、痢特灵等对病原菌具较强抑制作用,而复方新诺明、头孢拉定、呋喃妥因、麦迪霉素、氨苄青霉素等无抑菌作用．在此基础上进行了药物疗效试验。     

贪食迈阿密虫的体外培养及有效抗虫药物筛选

贪食迈阿密虫(Miamiensis avidus)是一种已知的养殖鱼类兼性寄生虫, 可严重危害养殖水产动物的健康并导致死亡. 为了研究有效的贪食迈阿密虫防治方法, 以从虎斑乌贼溃疡病患处分离的一株贪食迈阿密虫(SP-1株)为实验对象, 设计了一种贪食迈阿密虫的体外培养方法, 结果显示在最适生长温度为20℃, 培养至稳定期时虫体密度可达1×105个?mL-1. 采用体外浸浴模型分析了阿苯达唑、盐酸强力霉素、甲硝唑、硫酸奎宁、盐酸左旋咪唑、福尔马林和双氧水等药物对SP-1株的杀灭效果. 结果表明, SP-1株对硫酸奎宁、盐酸左旋咪唑的敏感性较高, 24h浸浴最小致死质量浓度分别为12.5μg?mL-1和25μg?mL-1; 体积浓度为50μL?L-1的福尔马林溶液或双氧水均可在1h内完全杀灭暴露在其中的SP-1株.     

鲫鱼维隆气单胞菌和腐败希瓦菌的分离鉴定、致病性和药敏分析

从患病鲫鱼肝、肾、血体内分离到JYV1605101和JYF1605102 2株细菌,人工感染试验和溶血活性测定表明这2株菌对健康鲫鱼具有较强毒力,菌株JYV1605101对鲫鱼LD_(50)为3.31×10~3cfu·g~(-1),对绵羊、小鼠、乌鳢、鲫鱼、鲤鱼、加州鲈等6种动物血细胞呈β溶血;菌株JYF1605102对鲫鱼LD_(50)为1.48×10~2cfu·g~(-1),对乌鳢、鲫鱼、鲤鱼、加州鲈的血细胞呈β溶血,但对绵羊和小鼠血细胞呈α溶血.经形态学观察,生理生化试验及16S rDNA基因序列分析,鉴定菌株JYV1605101为维隆气单胞菌(Aeromonas veronii),菌株JYF1605102为腐败希瓦菌(Shewanella putrefaciens).菌株JYV1605101具有胞外蛋白酶、明胶酶、淀粉酶活性,不具有脲酶、脂酶和卵磷脂酶活性;菌株JYF1605102具有胞外蛋白酶、明胶酶活性,不具有脲酶、脂酶、淀粉酶和卵磷脂酶活性.药敏试验表明,2株菌都对其中的18种药物较敏感,根据渔业用药规定和常用药情况,氟苯尼考、四环素、米诺环素、强力霉素可作为鲫鱼维隆气单胞菌和腐败希瓦菌感染的候选控制药物.     

奶酪中抗生素抗性基因检测及奶酪分离乳酸菌耐药性分析

抗生素抗性基因与细菌耐药性密切相关,其在食品中的存留状况越来越受到关注。奶酪是一种即食性发酵食品,在我国的消费量呈快速增长的趋势,本研究利用荧光定量PCR检测技术对国内外干酪和再制干酪样品中8大类抗生素抗性基因进行了检测,以期揭示其在奶酪制品中的存留和分布特点。结果显示:干酪和再制干酪这两类奶酪中存留了高丰度的抗性基因,除万古霉素类抗性基因外,其余7大类抗性基因在干酪和再制干酪样品中均检出,再制干酪中的各大类抗性基因检出率明显低于干酪样品,其中再制干酪中检出率较高的是氨基糖苷类、四环素类和大环内脂类-林可酰胺类-链阳性菌素B(MLSB)类抗性基因,干酪样品中检出率较高的是FCA(氟喹诺酮类、喹诺酮类、氟苯尼考、氯霉素和酰胺醇)类和氨基糖苷类抗性基因。分离自样品的18株乳酸菌药敏测试结果显示:耐药率较高的药物为磺胺恶唑(90.9%)和苯唑西林(86.36%);敏感率较高的是四环素(100%)和氨苄西林(100%)、氯霉素(81.8%);中介率最高的是环丙沙星(72.7%)和诺氟沙星(67.9%),上述研究结果表明市售奶酪中残留的抗生素抗性基因是一个不容忽视的问题。     

2020年宁波市主养海水鱼流行病学调查与药敏试验

为了解宁波地区水产养殖品种病害发生情况, 本研究于2020年通过定期抽检与应急检测相结合方式, 开展了地区性的主要海水鱼流行病学调查工作. 从大黄鱼、小黄鱼、七星鲈鱼、银鲳等海水鱼上共分离到细菌19株, 主要菌株为哈维氏弧菌和美人鱼发光杆菌; 检测出病毒阳性26批次, 主要为传染性脾肾坏死病毒和真鲷虹彩病毒; 镜检观察到寄生虫2例, 分别为东方鱼虱和梅氏新本尼登虫. 药敏试验结果显示: 从鱼体分离得到的致病菌对盐酸多西环素、氟甲喹敏感2种药物的最小抑菌浓度(MIC)普遍＜0.1 mg●L^-1, 因此其可作为优选药物进行细菌病的治疗. 另外发现在不同时间段, 大黄鱼上分离到的同种细菌对药物的敏感性并不一致. 药敏试验结果将有助于养殖户做到科学、精准用药, 同时也能为本地水产养殖动物病原菌的耐药性普查工作提供理论基础.     

蛋清溶菌酶基因的密码子优化及其在毕赤酵母中的分泌表达

作为一种天然的抑菌物质,溶菌酶对抗生素耐药菌有较强的杀伤作用，具有无耐药性、无残留等特点，被认为在诸如动物饲料、药品等领域可有效代替抗生素，改善滥用抗生素所引起的一系列问题，市场前景巨大。通过微生物发酵大规模生产重组溶菌酶符合市场发展趋势，由于目前生产的菌株表达量偏低，限制了溶菌酶的应用和产业化发展。为提高蛋清溶菌酶的发酵表达量，根据毕赤酵母密码子的偏爱性,对其编码基因进行密码子优化，并构建了真核分泌表达载体pPIC9K-coEWL，经遗传霉素G418抗性筛选后，获得了一株酵母转化子(G-p-coEWL)，其对G418的抗性浓度高达15 mg·mL^-1。在28℃、pH 6.0、转速240 r·min^-1和甲醇浓度1%的诱导条件下,酵母重组子G-p-coEWL经摇瓶培养72 h，实现了蛋清溶菌酶的分泌表达。在发酵上清液中，总蛋白浓度为 607 mg·L^-1，酶活达到677 U·mL^-1。此外，本实验还比较了葡聚糖凝胶柱Sephadex G-50和强酸性阳离子交换柱SP-Sepharose FF两种方法对目的蛋白的分离效果,得到 Sephadex G-50的分离效果更好，并在14.4 kDa处得到单一的溶菌酶条带。     

蛋清溶菌酶基因的密码子优化及其在毕赤酵母中的分泌表达

作为一种天然的抑菌物质,溶菌酶对抗生素耐药菌有较强的杀伤作用，具有无耐药性、无残留等特点，被认为在诸如动物饲料、药品等领域可有效代替抗生素，改善滥用抗生素所引起的一系列问题，市场前景巨大。通过微生物发酵大规模生产重组溶菌酶符合市场发展趋势，由于目前生产的菌株表达量偏低，限制了溶菌酶的应用和产业化发展。为提高蛋清溶菌酶的发酵表达量，根据毕赤酵母密码子的偏爱性,对其编码基因进行密码子优化，并构建了真核分泌表达载体pPIC9K-coEWL，经遗传霉素G418抗性筛选后，获得了一株酵母转化子(G-p-coEWL)，其对G418的抗性浓度高达15 mg·mL^-1。在28℃、pH 6.0、转速240 r·min^-1和甲醇浓度1%的诱导条件下,酵母重组子G-p-coEWL经摇瓶培养72 h，实现了蛋清溶菌酶的分泌表达。在发酵上清液中，总蛋白浓度为 607 mg·L^-1，酶活达到677 U·mL^-1。此外，本实验还比较了葡聚糖凝胶柱Sephadex G-50和强酸性阳离子交换柱SP-Sepharose FF两种方法对目的蛋白的分离效果,得到 Sephadex G-50的分离效果更好，并在14.4 kDa处得到单一的溶菌酶条带。