水稻花药培养简化培养基的研究

一、马铃薯取代 N_6培养基全部成分,与蔗糖、2,4-D 相配合,作为简化第一培养基,诱导效果一般低于 N_6,但在适宜条件下,可以提高。薯液浓度在10—30%范围内均有效,以20—25%较好。四个供试马铃薯品种、三种储存条件以及发芽马铃薯均能诱导水稻花粉去分化,但在诱导效果上有一定差异。补加铁盐有良好作用。二、水稻乳熟期谷浆与 N_6大量元素、铁、蔗糖与2,4-D 相配合,取代了 N_6的四种微量元素和四种有机成分,可以作为简化第一培养基。在多数情况下,谷浆培养基的诱导率低于N_6,而分化率高于 N_6.在适宜条件下,谷浆诱导效果可以超过 N_6.谷浆浓度在0.5—7%的范围内均能诱导愈伤组织。其中以浓度2%的效果较好。粳稻与秈稻的不同品种的谷浆都有诱导作用,但效果大小有所差别。在乳熟期范围内,不论发育早期、中期或后期的谷浆效果相近。用人工研磨、组织捣碎器提取以及高压灭菌低温储存等方法制作的谷浆均可应用。三、水稻乳熟期谷浆与 N_6大量元素、铁与蔗糖相配合,取代 N_6的四种微量元素、四种有机物质与两种植物激素,可以作为简化第二培养基,分化率与 N_6大致相近或较高。谷浆浓度0.5%—4%范围内似乎浓度愈高,分化效果愈好,初步探索了谷浆品种的效果。     

低温后处理及配合因素对小麦花药愈伤组织诱导的影响

本文试验了低温后处理及其配合因素(2,4-D)对于小麦花药愈伤组织诱导的影响.结果表明,低温对提高愈伤组织诱导的影响是明显的,处理时间以2—3天为宜.低温的作用可能是以提高花粉细胞的存活率、延缓花粉正常发育、促进大多数花粉发育“同步化”等来影响愈伤组织的形成的.在低温后处理时,加入2,4-D与否,明显影响低温处理效果.对药壁组织较嫩材料,低温后处理效果以无2,4-D存在较好;药壁较老的材料则相反.2,4-D的作用可能也影响花粉的发育,低温和2,4-D的配合,可能既促进花粉细胞发育“同步化”,也有利于花粉发育和药壁发育的协调,从而影响愈伤组织的形成.因此,在低温处理的同时配合其他因素处理,可能为进一步弄清低温的作用机理,研究药壁的作用等,提供有用的线索.     

药壁对花粉去分化的影响

实验结果表明,药壁组织,特别是毡绒层,影响花药培养的花粉去分化启动和诱导花粉愈合组织的形成.药壁的这种影响至少涉及下列两个方面:1)在花粉去分化中,药壁组织向花粉提供了必要的营养物质;2)通过药壁组织吸收、贮存和转化培养基中的外源物质,药壁起着花粉代谢库的作用.药壁的这些影响,可能是通过药壁组织和花粉细胞发育的协调来实现的.在花药培养过程中,药壁组织,特别是毡绒层,必须存在并保持一段时间的活性,又必须能适时解体,这样才有利于花粉去分化.因此,药壁对花粉去分化影响的范围和程度,部分将取决于在花药离体时药壁的发育状况及其以后的发育趋势     

水稻花药培养诱导花粉绿苗最适条件探讨(续)

(二)愈合组织的分化通过花药培养诱导所得的花粉愈合组织能否分化成绿苗,经几年来的工作实践看来,关键在于愈合组织本身的质量,在于花药材料的来源状况,在于去分化培养基成份和培养环境条件等。因此,要获得尽可能多的花粉绿苗,首先要搞好愈合组织诱导这一关,既要重视数量,更要重视质量。同时还要充分注意去分化培养中各因子对于分化培     

外沅激素在水稻花药培养中的作用

采用 N_6基本培养基,以 MCPA(2ppm)作为外沅激素,对水稻花药培养中的激素作用问题进行了研究。实验结果表明:虽然在无激素条件下少数花粉可以进行雄核发育,但外沅激素对愈伤组织的诱导,生长及其以后的分化均有重要的促进作用。根据培养不同时期的花药转移实验,发现外沅激素的作用在去分化培养阶段的全过程中都有所表现。但激素在培养前期的作用侧重对愈伤组织诱导率的影响;在培养后期则侧重对愈伤组织生长及其以后分化的影响。     

丁酸钠预培养对水稻花药绿苗形成的影响

对水稻花药进行了丁酸钠预培养的试验,结果表明:2mM丁酸钠24小时的预处理,可以促进小孢子的均等分裂,增加多核花粉的比例,并影响愈伤组织诱导率和愈伤组织的分化绿苗潜力,对愈伤组织分化绿苗的促进作用尤其显著。丁酸钠对愈伤组织诱导的作用,与介质的pH的值有关,pH7.0的培养基的诱导率低于pH5.8,但对分化有利。 文章讨论了丁酸钠促进愈防组织分化的可能原因,以及丁酸钠影响愈伤组织诱导和促进分化之间关系。     

水稻花药培养诱导花粉绿苗最适条件探讨

水稻花药培养单倍体育种技术在水稻育种上具有重要意义.这不仅能缩短育种工作年限,而且具有提纯复壮作用,是一种多、快、好、省的育种新技术.本文探讨水稻花药培养诱导花粉绿苗最适条件,分为诱导花粉愈合组织、愈合组织的分化和简化培养基问题等三个方面内容,综合了1974年第一次全国花粉培养工作经验交流会议以来国内兄弟单位试验研究成果,结合自己工作并借鉴国外有用资料,提出了我们的看法,以期获得更多水稻花粉绿苗,更多水稻新品种,为提高我国粮食产量,实现四个现代化作出应有的贡献.     

新疆紫草外植体诱导愈伤组织研究

以新疆紫草(Arnebia euchroma(Royle)Johnston)幼叶、子叶和胚轴作为外植体,诱导产生了愈伤组织,幼叶和子叶在MSB+NAA0.4ppm+2.4—D0.2ppm+6—BA0.6ppm的琼脂培养基上脱分化效果好,愈伤组织为白色半透明状;胚轴在LS+NAA0.4ppm+IAA1.5ppm+KT2.0ppm的琼脂培养基上脱分化较合适,愈伤组织为红、白两种颜色,平均脱分化率为68.7%,这些愈伤组织有紧密型和松散型两种形态,扫描电镜观察了紧密型白色愈伤组织的表面结构,可看到愈伤组织表面有许多突起的胚性细胞团,在继代培养过程中,多数这种愈伤组织能够再分化,形成胚芽。     

天目铁木愈伤组织和芽苗诱导技术

以天目铁木嫩茎尖为外植体,应用均匀设计法筛选其基部愈伤组织诱导和愈伤组织再分化芽苗的最适合培养基.结果表明,最适合的嫩茎尖基部愈伤组织诱导培养基为1/2DR+TDZ 2.30 mg·L^-1+2,4-D 0.55 mg·L^-1,诱导率为93.5%;愈伤组织芽苗再分化培养基为1/2DR+TDZ 3.30 mg·L^-1+KT 0.70 mg·L^-1,分化率达99.8%以上. 成功建立了天目铁木嫩茎尖离体诱导愈伤组织和芽苗再分化体系,且再生芽苗与野生植株染色体数目相同.     

结肠癌诱导分化基因表达差异的消减cDNA文库的建立

为保存和分析抑制性消减杂交 (SSH)获得的结肠癌经全反式维甲酸和 1 ,2 5-(OH) 2 D3联合诱导分化前、后的差异cDNA ,把消减产物与TA载体连接并转化到大肠杆菌中建立消减cDNA文库 .结果表明 :诱导前消减cDNA文库的容量为 1 .0 5× 1 0 4 pfu ,诱导后消减cDNA文库的容量为 1 .49× 1 0 4 pfu .本实验为进一步研究结肠癌的发病机制和诱导分化的机制提供了物质基础 .     

基于均匀设计优化深山草莓花瓣离体培养及植株再生体系

应用均匀设计法对深山草莓花瓣诱导愈伤组织和愈伤组织再分化芽苗的主要因子和水平进行了探讨.结果表明,深山草莓花瓣愈伤组织诱导的适宜培养基为LS+TDZ 2.06 mg.L-1+2,4-D 0.60 mg.L-1,诱导率为98%;愈伤组织再分化芽苗的适宜培养基为1/2 LS+TDZ 2.30 mg.L-1+NAA 0.10 mg.L-1+KT1.30 mg.L-1,分化率为96.3%.炼苗移栽后观察植株的形态、花、果及生长等特征,以筛选具有优良性状的株系.     

拟南芥菜Arabidopsis thaliana(L)Heynh的无菌培养和组织培养研究

我们对拟南芥菜无菌培养的条件作了初步研究。在培养过程中,对它的光周期反应进行试验,观察到它在25±1℃和光强度约4000勒克斯白色熒光连续光照的培养条件下,平均可在19天内开花;而以同样光强度,12小时光照/12小时黑暗交替处理时,则需要32天才能开花。据统计,经前法处理的植株,平均每株结实73.07±42.67粒,而后者则达150.00±42.67粒。同时,我们曾切取了无菌培养植株的茎段、叶柄和叶片进行组织培养,发现上述三种组织的外植体均能在附加2,4-D(0.5—5.0毫克/升)或NAA(1.0—8.0毫克/升)与KT(6-糠基氨基嘌吟,0.2或0.5毫克/升)的B_5和MS培养基上诱导出愈伤组织;并分別从它们分化出完整的再生植株。     

新疆紫草外植体组织培养和植株再生

新疆紫草[Arnebia euchroma (Rovle) Johnston]嫩芽和幼叶切段在含有不同激素组合的琼脂培养基上产生了愈伤组织,其中在MSB+0.4mg/L NAA+0.2mg/L 2.4—D+1.0mg/L KT中愈伤组织诱导率较高,达82.2％.这些愈伤组织经过继代,生长很快。转入分化培养基后,愈伤组织表面产生了很多不定芽和少量胚状体。不定芽经扶壮,诱导生根,生长成完整植株并移栽成活。     

彩色棉再生体系影响因子及抗病基因NP-1转化的研究

选用彩色棉优良品种(棕色)：新彩1号、新彩2号，以下胚轴和子叶作为外植体，确立了5～6日苗龄的彩色棉下胚轴是较好的愈伤组织诱导外植体，不同激素组合及浓度对愈伤组织的诱导有重要作用，2，4—D是愈伤组织诱导中重要的激素，在附加有0．1mol／L2，4—D 0．1mol／LKT的MSB培养基上，诱导形成的愈伤组织质地疏松、生长旺盛，有利于分化为胚性愈伤，比较了不同糖源在愈伤组织诱导中的效应，在蔗糖和葡萄糖为糖源的培养基中，愈伤组织诱导率均为100％，但葡萄糖更有利于愈伤组织的形成和生长，蔗糖的诱导效果次之；麦芽糖和乳糖对愈伤组织的诱导效应不及蔗糖和葡萄糖；甘露醇作为糖源则抑制了愈伤组织的诱导和生长，在胚性愈伤组织的诱导培养中，KNO3加倍和NH4NO3减半的组合利于胚性愈伤组织的发生，在根癌农杆菌介导的抗病基因兔防御素NP—1转化过程中。外植体经农杆菌浸染10min，共培养48h较为合适，在添加头孢霉素500mg／L、卡那霉素50mg／L的培养基中筛选抗性愈伤组织。     

莴苣 (Lactuca sativa L) 髓组织的愈伤组织形成和植株再生的研究

本文研究了莴苣髓组织外植体愈伤组织的诱导形成和愈伤组织的器官分化.髓组织的外植体在含有2毫克/升NAA和2.5毫克/升KT的稍加改动的Miller培养基上只要6天时间,就可诱导产生出愈伤组织.并证明了莴苣髓组织的愈伤组织需要同时提供外源生长素和激动素才能正常增生.在愈伤组织的分化中,发现根的分化较为容易,而芽的分化则较为困难.它不但受激素的配比的影响,而且也受培养基的渗透压和离子浓度的影响.变换培养基类型有利于组织上芽的分化.从愈伤组织分化出的小苗能在试管里抽苔、开花.     

大麦幼胚培养的初步研究

大麦幼胚组织培养结果初步表明,两种培养基之间,两个品种之间总出愈率没有显著差异,而不同类型愈伤组织诱导率却存在差异。Ⅱ号培养基中,甲、乙两种类型愈伤组织产生比例多于Ⅰ号培养基,丙型愈伤组织正好相反。因此认为Ⅱ号培养基对大麦幼胚培养中诱导出愈及生长是较理想的。啤酒大麦品种“付8”的甲型愈伤组织比例大于高蛋白品种“Hiproly”。愈伤组织和胚芽的总过氧化物酶活性变化较大,但规律不明显,因此很难作大麦幼胚培养中愈伤组织诱导、生长及分化的指标。过氧化物酶同工酶和酯酶同工酶的电泳分析,表明不同品种,培养基、组织器官之间存在一些差异。改进与扩大试验设计进一步探索提高出愈及分化率的研究正在进行中。     

光敏细胞质不育小麦花药发育过程中ABA免疫电镜定位

运用胶体金免疫电镜定位方法研究了不同光周期条件下光敏细胞质不育小麦发育过程中ABA的分布,短日照条件下,花粉母细胞细胞质基质及小液泡内有金颗粒分布;单核至二核花粉时期花粉内金颗粒逐渐增多,二核至成熟花粉时期花粉内金颗粒逐渐减少,不同发育时期的花粉内金颗粒的分布位置有变化,绒毡层或降解中的绒毡层细胞内有较多金颗粒分布,长日照条件下花粉败育,不同发育时期的花粉内金颗粒分布数量均比同时期的可育花粉内明显增多,单核期以前败育的花粉,解体的花粉细胞质及细胞核内有较多金颗粒分布;后期败育的花粉,花粉母细胞至二核花粉时期花粉（母细胞）内金颗粒有不断增加的趋势,二核期以后,花粉逐渐液泡化,解体的花粉细胞质及逐增大的中央液泡内在大量的金颗粒分布,绒毡层细胞内金颗粒有逐渐减少的趋势,文中对ABA在雄蕊,花粉发育过程中的作用,由光周期诱导的ABA含量增加在雄性不育中的作用进行了讨论。     

DMSO对籼稻广陆矮4号种子愈伤组织诱导、再分化和过氧化物酶同工酶谱的影响

本文以二甲亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)作为外源因素研究其对培养的植物外植体的影响。 材料与方法 籼稻广陆矮4号(Oryza Satira L.Subsp.Indica CV.Guangluai 4)种子.1.1％DMSO预处理:去壳种子经酒精表面消毒后,浸于1％DMSO水溶液中,在25—30℃振荡培养6,12,24小时,并以不经DMSO溶液浸种的种子为对照。2.诱导培养基:N6,加蔗糖3％,2.4-D3mg/l,KT0.5mg/l,pH5.8。分化培养基:MS,加蔗糖3％,NAA0.5mg/l,KT10mg/l,水解乳蛋白500mg/l,pH5.8。培养条件:25±1℃,光照培养。接种9—10天后,统计愈伤组织诱导率,转入分化培养后15天统计分化率。3.过氧化物酶同工酶凝胶电泳:按照方国伟等的方法进行。     

小麦花药组织培养前期花粉和药壁的变化

本工作是对小麦花药培养前期花粉粒的去分化启动和药壁的变化进行了初步的研究.结果如下:1.花粉粒的对等分裂高峰与绒毡层的衰退有关系.2.在培养12天的材料中,花粉囊内出现了多核花粉和多细胞团, 后者还可看到靠近药壁的一侧长出两条类似小柄的管子,具固着作用3.药壁的中层细胞很早就衰退,绒毡层细胞在培养初期也很快衰退.而表皮层细胞与纤维层细胞的壁具有特殊的次生加厚.因此,由药壁细胞形成愈伤组织的可能性要小一些4.在药隔分化程度较低的维管束部位,有时细胞能增生,形成药隔愈伤组织.     

Rb蒸气中激光诱导5P和5D态的布居数变化

在Rb蒸气中观察了荧光强度的增强与减弱.5P3/2态荧光的减弱是由于激光激发5P3/2—→5D5/2的跃迁造成的,5D5/2态原子碰撞转移到5D3/2,产生5D3/2—→5P1/2的辐射,增加了5P1/2态的布居,从而使5P1/2—→5S1/2的荧光增强.激光诱导布居数的变化由相应荧光的强度信号的增减来检测,利用速率方程组,得到了受激发射(即5D5/2—→5P3/2)速率为2.0×108s-1,精细结构碰撞转移(即5D5/2—→5D3/2)截面为6.4×10-14cm2.