基于多光谱技术和计算机模拟研究牡荆素抑制α-淀粉酶的分子机制

本文采用多种光谱学方法结合计算机模拟手段,通过研究牡荆素对α-淀粉酶的抑制作用、相互作用的结合特性和空间结合构象及其诱导酶分子结构的变化对酶催化底物的影响,进而阐释牡荆素抑制α-淀粉酶的分子机制。结果表明,牡荆素以可逆性竞争的方式抑制α-淀粉酶的活性,其半抑制浓度(IC50值)为2.25×10-3 mol·L-1,抑制常数为(2.28±0.13)×10-3mol·L-1。牡荆素也能够与淀粉结合来减少淀粉的消化分解为葡萄糖。牡荆素通过单一静态方式猝灭α-淀粉酶的内源荧光,其中荧光基团Trp残基的贡献大于Tyr残基。牡荆素结合在α-淀粉酶的一个位点处,结合常数Ka为103数量级,主要依靠疏水力驱动,两者结合作用使α-淀粉酶的α-螺旋含量降低,β-折叠和β-转角含量增加,表面疏水性减小,酶结构趋于松散。分子模拟显示,牡荆素能够对接于α-淀粉酶的活性空腔,并与周围的氨基酸残基Asp197、Glu233、Ile235、His299、Asp300与His305等发生相互作用。推测牡荆素通过与α-淀粉酶结合,改变了酶分子的构象,并且与底物竞争α-淀粉酶的活性位点,而阻碍了底物被酶分解,进而抑制了α-淀粉酶的活性。     

基于转录组数据分析杜氏盐藻能量代谢途径

通过杜氏盐藻转录组测序,共获取39 820个单一基因.基于转录组功能注释和聚类分析预测了杜氏盐藻能量分子的代谢途径,并分析了脂质(脂肪酸和三酰基甘油)及淀粉代谢路径中的关键酶(乙酰辅酶A羧化酶、二酰基甘油O-酰基转移酶、葡萄糖-1-磷酸腺苷转移酶和淀粉磷酸化酶)的作用.分析结果显示,在三酰基甘油合成途径中,杜氏盐藻除了存在传统的酰基辅酶A依赖型合成通路外,还可能存在一条酰基辅酶A非依赖型合成通路.通过抑制淀粉的分解代谢(如干扰α-淀粉酶或淀粉磷酸化酶基因)或促进淀粉合成代谢(如高表达葡萄糖-1-磷酸腺苷转移酶基因),可能导致杜氏盐藻淀粉含量的增加.而抑制淀粉合成或促进淀粉分解代谢,也会导致杜氏盐藻脂质的增加.     

秋葵果皮多糖基本结构特征、流变性能及抗氧化特性

采用热水浴(60℃)、沸水浴和酸法从秋葵[Abelmoschusesculentus(L.) Moench]果皮中依次提取、纯化各多糖组分,所得组分分别记为水溶性多糖-1(OPWE-60)、水溶性多糖-2(OPWE-100)、酸溶性多糖(OPAE-60),并对比了秋葵果皮多糖基本结构特征,流变性能及抗氧化能力差异。结果显示,秋葵果皮中主要含有OPWE-60(12.0%)、OPWE-100(8.0%)以及少量OPAE-60(0.8%),三者均富含Gal和GalA,其他组成单糖还有Rha、Ara、Glc和GlcA,表明上述3种秋葵果皮多糖均为果胶类多糖。在相同浓度下,OPWE-60比OPWE-100、OPAE-60拥有更高的表观黏度。相对于另外两个组分,OPWE-60拥有更好地清除DPPH自由基和羟基自由基能力。因此,秋葵果皮的主要组分在60℃提取温度下便能提取获得,同时该组分具有较好抗氧化功能和高黏性特征,在食品工业中具有潜在应用价值。     

阿牙克库木湖嗜盐菌的分离及功能酶的筛选

从新疆阿尔金山国家自然保护区阿牙克库木湖采集的泥样和水样中,分离培养了90株嗜盐菌,其中多数为中度和极端嗜盐菌,颜色以红色和白色为主,细胞形态多为杆状、球状,97％呈革兰氏阴性,研究结果表明该湖有着丰富的嗜盐微生物资源．对分离菌株进行了几种重要工业用酶的筛选,发现其中淀粉酶产生菌有4株,菌株AJ225和AJ243淀粉酶活性较高;蛋白酶产生菌有7株;脂肪酶生产菌有13株,菌株AJ238和AJ265具有较高的酶产量;在分离菌株中未检测到纤维素酶和木聚糖酶活性．     

黄原胶与魔芋葡甘聚糖马来酸酯的协同相互作用及其凝胶化的研究

黄原胶-魔芋葡甘聚糖马来酸酯(AME)通过改变各种比例成分制备了混合凝胶．当多糖总浓度为1%，黄原胶对AME的共混质量比例为70／30，并在80℃水浴中恒温0．5h，可达协同相互作用的最大值；研究了制备温度(L)和体系盐离子浓度对凝胶化的影响；并把改性的AME-黄原胶与未改性的魔芋葡甘聚糖(AGM)-黄原胶的混合凝胶性能进行了比较．结果发现，两者均具有相似行为，只不过黄原胶-AGM的凝胶强度、粘度等比较低．同时从其FTIR谱图上分析了这两种多糖分子间相互作用的机理．     

牛蒡多糖组分的高效阴离子交换-脉冲安培分析

应用高效阴离子交换色谱 脉冲安培检测器联用技术,研究了牛蒡多糖组分的检测方法和条件.以牛蒡为原料,采用水提醇沉法提取牛蒡粗多糖,并对其工艺进行探讨.牛蒡粗多糖经超声波酸水解处理后进行离子色谱分析,其最佳色谱条件为：以12 mmol·L-1 NaOH溶液为淋洗液,流动相流速为1.0 mL·min-1,Carbo PaC PA10（250 mm×4 mm i. d.）为分析柱,进样量25 μL.结果表明,牛蒡多糖中主要含有阿拉伯糖、果糖、葡萄糖和半乳糖,在优化的色谱条件下,各种单糖组分在一定浓度范围内线性关系良好,能很好地分离和准确测定.该方法操作简便、灵敏度高、重现性好.     

UPLC / Q-TOF 鉴定染料木素在小鼠血浆中的代谢产物

建立一套稳定、灵敏度高、重现性好和耗时短的鉴定小鼠灌胃染料木素单体后体内代谢产物的分析方法,检测染料木素在小鼠血浆中代谢产物的形式与含量。12只健康雌性小鼠按200 mg·kg-1灌胃染料木素单体,血浆预处理处理后,使用超高效液相色谱(UPLC)/四极杆-飞行时间串联质谱仪(Q-TOF)检测,以体积分数2.5 mM乙酸铵缓冲液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,电喷雾离子源负离子条件下进行MS1和MS2全扫描,鉴定小鼠给药染料木素单体后血浆中的代谢产物。染料木素在小鼠血液中的代谢产物的主要存在形式是染料木素-葡糖醛酸,约占54.82%;其次是染料木素-硫酸酯,约占26.67%;也有一小部分(16.61%)以染料木素苷元的形式存在。UPLC/Q-TOF可快速、有效地鉴定出小鼠血浆中染料木素的代谢产物,为今后进行染料木素与人类健康效应相关的研究提供参考。     

鱼腥草水溶性多糖的理化性质及体外抗氧化活性

从鱼腥草中提取出一种水溶性多糖,运用化学分析法、光谱学法、色谱法及扫描电镜法对鱼腥草多糖（Houttuynia cordata polysaccharide, HCP）的基本理化性质、相对分子量、单糖组成及固态形貌等进行分析并对其体外抗氧化活性进行研究。结果显示HCP为含吡喃糖结构的酸性果胶类均一多糖,其重均相对分子量为3.87×105 Da,且该多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸8种单糖组成。扫描电镜分析发现HCP主要由杆状、丝状和球状物质组成。体外抗氧化实验表明HCP有明显的DPPH自由基和·OH的清除作用,其清除活性可分别高达到87.18%和31.37%。因此,本研究的结果可为HCP的生物活性研究奠定基础,且有利于鱼腥草资源的开发应用。     

瑶药长柄瓜馥木的化学成分及抗痛风作用的网络药理学

对瑶药长柄瓜馥木Fissistigma oldhamii var.longistipitatum的化学成分进行分离鉴定，同时运用网络药理学研究其抗痛风的多成分、多靶标、多途径作用机制。采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS等多种柱色谱以及制备型HPLC等现代分离技术对长柄瓜馥木化学成分进行分离纯化，根据其理化性质、NMR波谱技术进行结构鉴定；并对分离得到的化学成分进行生物信息学手段分析。从长柄瓜馥木中分离得到18个化合物，结构鉴定为：鹅掌楸碱(1)、氧代克列班宁(2),oxobuxifolina(3),观音莲明碱(4),O-甲基芒籽碱(5),芒籽香碱(6),4,5-Dioxodehydroasimilobine(7),缺碳金线吊乌龟二酮B(8),胡椒内酰胺A(9),胡椒内酰胺C(10),马兜铃内酰胺AIa(11),马兜铃内酰胺Allla(12),goniothalactam(13),goniopedaline(14),马兜铃内酰胺BⅢ(15),5,6,7,8-四甲氧基黄酮(16),5,8-二羟基-6,7-二甲氧基黄酮(17),Methylpedicin(18)。网络药理学研究分析发现长柄瓜馥木可能通过5,8-二羟基-6,7-二甲氧基黄酮、goniothalactam、5,6,7,8-四甲氧基黄酮、观音莲明碱等活性成分，作用于GAPDH、白介素-6(IL-6)、VEGFA、MAPK1、SRC等靶点，调节TNF通路、Toll样受体通路、PI3K-Akt通路等信号通路发挥抗痛风作用。     

红旱莲黄酮的色谱分析及酪氨酸酶抑制作用

采用高效液相色谱技术分析了纯化后的红旱莲黄酮中的主要黄酮组分,通过测定抑制率和抑制动力学,评估了红旱莲总黄酮对酪氨酸酶的抑制作用及抑制机理。结果表明,槲皮素是纯化后的红旱莲黄酮中的主要黄酮成分,其后依次为芦丁、黄芪苷、山奈酚、金丝桃苷和异槲皮素,其总黄酮含量为44.7%。与阳性对照曲酸相比,红旱莲黄酮是一种有效的酪氨酸酶抑制剂(IC50=46.99μg·mL-1),其抑制类型是典型的可逆竞争型,抑制常数Ki为34.07μg·mL-1。     

桑色素对肿瘤细胞氨肽酶N抑制机理初探

采用酶抑制动力学方法,研究了桑色素对氨肽酶N的抑制作用、抑制类型和抑制动力学常数,进行了白血病细胞生长抑制试验,并研究了氨肽酶N与桑色素相互作用时的分子结构变化。结果表明,桑色素是一种非竞争型氨肽酶N抑制剂(半抑制率IC_(50)为(55.65±3.33)μmol·L~(-1),抑制常数Ki为(12.43±1.35)μmol·L~(-1)),失活动力学时间进程分析表明桑色素能快速与氨肽酶N发生作用并迅速降低酶的活性;桑色素能够诱导白细胞细胞HL-60的凋亡;圆二色谱分析表明桑色素导致氨肽酶N的结构变得紧密,使α-螺旋含量增加,而不利于其形成活性中心,进而导致氨肽酶N活性的降低,这也是造成白细胞细胞HL-60凋亡的重要原因。     

一种池蝶蚌多糖的分离纯化、表征特性及体外抗氧化活性

首次从淡水育珠贝类池蝶蚌中得到多糖组分,探讨了相关提取工艺、理化特性以及体外抗氧化活性。Sevag工艺重复5次游离蛋白清除效果最佳,粗多糖经sevag纯化得率达到20.8%;通过离子交换树脂(DEAE-52)及葡聚糖凝胶柱层析(Sephacryl S-300)分离纯化得到池蝶蚌多糖(HSP-1),纯度达到97.5%;测定HSP-1的部分理化特性,测得其分子量为2 204Da,其单糖组成由64.8%的葡萄糖、17.4%的阿拉伯糖以及17.8%的葡糖醛酸组成;抗氧化活性测定结果表明,HSP-1对于DPPH、超氧自由基、羟自由基的最大清除率分别是62.16%,58.65%和45.21%。根据结果 HSP-1具有明显的抗氧化能力。     

国内主要石斛种类茎部有效成分石斛多糖的含量比较

多糖含量是衡量石斛品质优良的指标之一。为比较不同种及产地石斛植物多糖的差异，筛选出具有潜在保健价值的石斛植物，对收集到的25种石斛属鲜石斛(含一品种)和1种金石斛属鲜石斛为原料，使用匀浆机粉碎，热水浸提，苯酚-硫酸法结合紫外-可见分光光度法测定多糖含量。结果表明：石斛多糖含量介于0.044%～30.086%之间(以鲜品记)。霍山米斛多糖含量最高，其次为铁皮石斛、报春石斛、密花石斛和矩唇石斛，反瓣石斛最低；直接使用鲜石斛提取多糖具有可行性；霍山米斛(30.086%)为高多糖优质石斛植物，与其余石斛植物有显著性差异；首次新增测定矩唇石斛(13.028%)、血喉石斛(10.976%)、晶帽石斛(4.993%)、龙石斛(3.106%)、红牙刷石斛(0.528%)和金石斛(0.531%)的多糖含量，其潜在保健药用价值有待进一步研究挖掘。     

玉竹多糖分离纯化、理化性质及抗氧化功能

采用热水浸提法从玉竹提取获得多糖POA,进一步利用乙醇分级沉淀方法进行分离纯化,获得均一性较好的POA-70P和POA-70S组分,进一步分析了多糖单糖组成、相对分子质量、红外光谱等基本理化性质,并通过DPPH自由基清除能力和羟基自由基清除能力评价其体外抗氧化功能。结果表明,玉竹多糖POA-70P和POA-70S主要由中性糖组成,相对分子质量分别为4.51×10~4 Da和3.89×10~3 Da,单糖组成分析显示,POA-70S中存在大量的果糖,及少量岩藻糖、葡萄糖、甘露糖,POA-70P中主要存在甘露糖,葡萄糖和半乳糖,以及少量的阿拉伯糖和半乳糖醛酸;此外玉竹多糖POA、POA-70P和POA-70S对羟基自由基有较好的清除作用,浓度为4 mg·mL~(-1)清除能力能达到48%,并呈现剂量依赖性;但对于DPPH自由基清除能力较差,浓度从0.5 mg·mL~(-1)增大到4 mg·mL~(-1)的过程中,清除能力始终处于20%左右。     

大米草多糖的水解及其抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

通过对硫酸和固态酸对大米草多糖水解的条件及其水解产物的抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究，结果表明：大米草多糖水解产物具有较强的抗氧化活性，其最佳硫酸水解浓度为1．6mol·L^-1佳水解时间为4h，水解产物的羟基自由基清除率为85．7％，最佳固态酸水解条件为90℃，4h，羟基自由基清除率为82．0％．大米草多糖水解产物对仪．葡萄糖苷酶也具有一定的抑制作用，其最佳硫酸水解浓度为0．6mol·L^-1佳水解时间为5h，水解产物对仪．葡萄糖苷酶的抑制率为48．6％．研究结果初步证明大米草多糖水解产物是一种重要的生物活性物质，为大米草多糖的开发利用提供了技术方法和理论依据．     

海菖蒲浸提液对球形棕囊藻的抑制效应

为探索海菖蒲(Enhalus acodoides)浸提液对有害赤潮藻的抑制效果,分别采用海菖蒲植株干粉的人工海水、无水乙醇和正己烷3种溶剂(极性由强到弱)提取液对球形棕囊藻(Phaeocystis globosa)进行抑制效应实验,结果表明:1)水浸提液在浓度为10 g·L~(-1)时对球形棕囊藻有显著的抑制效应(p 0. 05),最高抑制率为94. 72%,乙醇浸提液在浓度为50 mg·L~(-1)时对球形棕囊藻有显著抑制效应(p 0. 05),最高抑制率为77. 72%,正己烷浸提液对球形棕囊藻无显著抑制效应(p 0. 05);海菖蒲中能够抑制球形棕囊藻生长的物质应为极性物质; 2)水浸提液能够干扰球形棕囊藻的抗氧化系统,使其藻细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量显著升高(p 0. 05); 3) 0. 25%(体积分数)的二甲基亚砜(DMSO)对球形棕囊藻生长无显著抑制效应(p 0. 05).     

豌豆多糖对DSS诱导结肠炎小鼠的保护作用

结肠炎发病率和流行率较高且其治疗药物存在一定副作用,因此人们逐渐寻求包括多糖在内的天然来源化合物作为治疗结肠炎的新手段。本研究采用水提醇沉提取、制备豌豆多糖,分析其基本理化性质特征,进一步构建葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠溃疡性结肠炎模型,研究低、中、高(200,400,600 mg·kg-1小鼠体重)剂量豌豆多糖对小鼠溃疡性结肠炎的干预效果。结果显示,纯化后的豌豆多糖总糖含量可达85.1%,主要组分重均分子量为610 kDa,主要由Ara(20.1%)、Gal(15.1%)和GalA(13.1%)等单糖组成,是一种果胶类多糖。动物实验结果显示,相比于低剂量和高剂量,中剂量豌豆多糖表现出更好的保护作用,能够在一定程度上延缓体重下降和DAI值上升,抑制结肠缩短,降低结肠组织炎症浸润,保护其结构完整。豌豆多糖干预降低了促炎细胞因子IL-6、IL-1β水平,提高了抗炎细胞因子IL-10、IL-22(P<0.05)水平。综上所述,豌豆来源多糖是一种果胶类多糖,可通过调节炎症因子表达进而发挥对DSS诱导结肠炎小鼠的保护作用,上述结果为开发天然来源的结肠炎辅助治疗产品提供理论依据。     

高效液相色谱法测定α-环糊精的对甲苯磺酰化产物

单对甲苯磺酰-α-环糊精酯(mono-OTs-α-CD)是制备其他α-CD单衍生物的重要中间体。建立了一种测定α-环糊精对甲苯磺酰化反应产物的液相色谱新方法。3种不同碳位上(C3、C2和C6)的(mono-OTs-α-CD)在ODS柱上被完全分离,保留时间依次为7.70、10.08和12.18 min。它们在5～500 mg·L^-1范围内的线性回归方程分别为y=89.176x-559.19(R²=0.999 0),y=87.917x-430.16(R²=0.999 6)和y=70.529x-24.259(R²=0.999 2),回收率为92.5%～102.3%,RSDs小于1.8%,检出限(LOD)较低(0.5 mg·L^-1),说明该方法的准确性和精密度较好,能满足反应监测要求。初步考察了原料投料比、反应温度、反应时间和反应体系酸碱度对单取代反应的影响,在优化的反应条件(投料比为1:2,反应温度为15℃,反应时间为15 min)下,C3位上的mono-OTs-α-CD产率可达3...     

苯酚钠对2-NO_2-TPP及其金属配合物的亲核取代

研究了苯酚钠对2-NO2 -5,10,15,20-四苯基卟啉(2-NO2-TPP)1 及其铜(Ⅱ)2、镍(Ⅱ)3、铁(Ⅲ)4、钴(Ⅱ)5等金属配合物的亲核取代. 在苯酚中反应, 主要产物分别为2-(2-羟基苯基)-5,10,15,20-四苯基卟啉6(44% )及相应金属配合物7(50% )、8(52% )、9(51% )、10(51% ), 2-(4-羟基苯基)-5,10,15,20-四苯基卟啉11(33% )及相应金属配合物12(28% ),13(26% ),14(23% )、15(26% ). 对-二硝基苯(P-DNB)能抑制反应的进行.如化合物2 反应加入p-DNB, 反应由4 h 延长到10 h,同时得到70% 的2-苯氧基-5,10,15,20-四苯基卟啉铜16.实验结果由SRN1 和SN Ar的竞争来解释,其中碳碳键取代产物经SRN1 生成,醚键产物经SNAr生成.     

卡玛古籽油中脂肪酸成份分析

用气相色谱(GC)与气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对卡玛古籽油中的脂肪酸成份进行了定性与定量分析,共鉴定出七种脂肪酸.其各种脂肪酸的含量分别为:棕榈酸(C16)2.50%、亚油酸(C18:2)16.65%、油酸(Z)(C18：1)12.38%,油酸(E)(C18 : 1)10.03%、16-甲基-十七烷酸(C18:0)8.08%、二十碳烯-11-酸(C201)0.84%、花生酸(C20：0)48.43%.